Окрашивание по Фельгену - это метод окрашивания , открытый Робертом Фельгеном и используемый в гистологии для идентификации хромосомного материала или ДНК в образцах клеток. Он тёмный. Это зависит от кислотного гидролиза ДНК, поэтому следует избегать использования фиксирующих агентов с сильными кислотами .
Образец обрабатывают теплой (60 ° C) соляной кислотой , затем реактивом Шиффа . Раньше следовала промывка сульфитом , но теперь это считается ненужным. По желанию образец можно контрастировать с желтоватым светло-зеленым SF . Наконец, его обезвоживают этанолом , очищают ксилолом и помещают в смолистую среду.
ДНК должна быть окрашена в красный цвет. Фон, если он окрашен, зеленый.
Реакция Фельгена - это полуколичественный метод. Если в клетке остаются только альдегиды, образующиеся в результате гидролиза ДНК, тогда метод является количественным для ДНК. Можно использовать инструмент, известный как микроденситометр или микроспектрофотометр, чтобы фактически измерить интенсивность розовой реакции Фельгена для данной органеллы . С помощью этой процедуры было ранее определено, что интерфазные клетки состоят из двух популяций: с диплоидной ДНК и с тетраплоидной ДНК (два полных генома). Ядра выглядели одинаково, но одно содержало вдвое больше ДНК. Это привело к разделению межфазного периода клеточного цикла.к фазам G1, S и G2 на основе синтеза этой дополнительной ДНК. [1]
Ссылки [ править ]
