Из Википедии, бесплатной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску
Визуализация мультиплексной РНК в клетках с использованием анализов ViewRNA FISH
Метафазная клетка, положительная по реаранжировке bcr / abl (ассоциированная с хроническим миелогенным лейкозом ) с использованием FISH. Хромосомы можно увидеть синим цветом. Хромосома, помеченная зелеными и красными пятнами (вверху слева), является той, где присутствует перестройка.

Флуоресцентная гибридизация in situ ( FISH ) - это метод молекулярной цитогенетики , в котором используются флуоресцентные зонды, которые связываются только с теми частями последовательности нуклеиновой кислоты, которые обладают высокой степенью комплементарности последовательности . Он был разработан биомедицинскими исследователями в начале 1980-х годов [1] для обнаружения и локализации наличия или отсутствия определенных последовательностей ДНК на хромосомах . Флуоресцентная микроскопия может использоваться, чтобы выяснить, где флуоресцентный зонд связан с хромосомами. FISH часто используется для нахождения определенных особенностей ДНК для использования вгенетическое консультирование , медицина и идентификация видов. [2] FISH также может быть использован для обнаружения и локализации специфических РНК-мишеней ( мРНК , днРНК и миРНК ) [ необходима ссылка ] в клетках, циркулирующих опухолевых клетках и образцах тканей. В этом контексте он может помочь определить пространственно-временные паттерны экспрессии генов в клетках и тканях.

Зонды - РНК и ДНК [ править ]

ViewRNA обнаружение miR-133 (зеленый) и мРНК миогенина (красный) в дифференцирующихся клетках C2C12

В биологии зонд представляет собой одиночную цепь ДНК или РНК, которая комплементарна интересующей нуклеотидной последовательности.

Зонды РНК могут быть разработаны для любого гена или любой последовательности в гене для визуализации мРНК , [3] [4] [5] днРНК [6] [7] [8] и миРНК в тканях и клетках. FISH используется для изучения цикла клеточного воспроизводства, в частности, межфазной границы ядер на предмет любых хромосомных аномалий. [9] FISH позволяет анализировать большую серию архивных случаев, намного проще идентифицировать точно определенную хромосому, создавая зонд с искусственным хромосомным основанием, который будет привлекать похожие хромосомы. [9] Сигналы гибридизации для каждого зонда при обнаружении нуклеиновой аномалии. [9]Каждый зонд для обнаружения мРНК и днРНК состоит из ~ 20-50 пар олигонуклеотидов, каждая пара покрывает пространство 40-50 п.н. Специфика зависит от конкретной используемой техники FISH. Для обнаружения miRNA зонды используют запатентованную химию для специфического обнаружения miRNA и покрывают всю последовательность miRNA.

Уротелиальные клетки, отмеченные четырьмя разными зондами

Зонды часто получают из фрагментов ДНК, которые были выделены, очищены и амплифицированы для использования в проекте « Геном человека» . Размер человеческого генома настолько велик по сравнению с длиной, которую можно было секвенировать напрямую, что необходимо было разделить геном на фрагменты. (В конечном итоге эти фрагменты были упорядочены путем переваривания копии каждого фрагмента на еще более мелкие фрагменты с помощью специфичных для последовательности эндонуклеаз, измерения размера каждого небольшого фрагмента с помощью эксклюзионной хроматографии.и используя эту информацию, чтобы определить, где большие фрагменты перекрывают друг друга.) Чтобы сохранить фрагменты с их индивидуальными последовательностями ДНК, фрагменты были добавлены в систему постоянно реплицирующихся популяций бактерий. Клональные популяции бактерий, каждая из которых поддерживает одну искусственную хромосому, хранятся в различных лабораториях по всему миру. Искусственные хромосомы ( BAC ) можно выращивать, извлекать и маркировать в любой лаборатории, содержащей библиотеку. Геномные библиотеки часто называют в честь учреждения, в котором они были разработаны. Примером может служить библиотека RPCI-11, названная в честь Института рака Розуэлл-Парк в Буффало, штат Нью-Йорк. Эти фрагменты имеют порядка 100 тысяч пар оснований и являются основой для большинства FISH-зондов.

Процесс подготовки и гибридизации - РНК [ править ]

Клетки, циркулирующие опухолевые клетки (ЦКО) или фиксированные формалином залитые парафином (FFPE) или замороженные срезы ткани фиксируют, затем проницают для обеспечения доступности мишени. FISH также успешно проводился на незакрепленных ячейках. [10] Зонд, специфичный для мишени, состоящий из 20 пар олигонуклеотидов, гибридизуется с целевой РНК (ами). Отдельные, но совместимые системы усиления сигнала позволяют проводить мультиплексный анализ (до двух мишеней на анализ). Усиление сигнала достигается посредством серии последовательных шагов гибридизации. В конце анализа образцы ткани визуализируются под флуоресцентным микроскопом.

Процесс подготовки и гибридизации - ДНК [ править ]

Схема принципа эксперимента FISH по локализации гена в ядре.

Сначала строится зонд. Зонд должен быть достаточно большим для специфической гибридизации со своей мишенью, но не настолько большим, чтобы препятствовать процессу гибридизации. Зонд помечается непосредственно флуорофором , мишенями для антител или биотином . Мечение может быть выполнено различными способами, такими как ник-трансляция или полимеразная цепная реакция с использованием меченых нуклеотидов .

Затем получают препарат интерфазной или метафазной хромосомы. Хромосомы прочно прикреплены к подложке , обычно к стеклу. Повторяющиеся последовательности ДНК необходимо блокировать путем добавления к образцу коротких фрагментов ДНК. Затем зонд наносят на хромосомную ДНК и инкубируют приблизительно 12 часов при гибридизации. Несколько стадий промывки удаляют все негибридизированные или частично гибридизированные зонды. Затем результаты визуализируются и количественно оцениваются с помощью микроскопа, который способен возбуждать краситель и записывать изображения.

Если флуоресцентный сигнал слабый, может потребоваться усиление сигнала, чтобы превысить порог обнаружения микроскопа . Сила флуоресцентного сигнала зависит от многих факторов, таких как эффективность маркировки зонда, тип зонда и тип красителя. Флуоресцентно меченые антитела или стрептавидин связываются с молекулой красителя. Эти вторичные компоненты выбраны так, чтобы у них был сильный сигнал.


Варианты зондов и анализа [ править ]

FISH - это очень общая техника. Различия между различными методами FISH обычно обусловлены вариациями в последовательности и маркировке зондов; и как они используются в сочетании. Зонды делятся на две общие категории: клеточные и бесклеточные. Под флуоресцентной гибридизацией "in situ" подразумевается размещение зонда в клетке.

Размер зонда важен, потому что более длинные зонды гибридизуются менее специфично, чем более короткие зонды, поэтому короткие цепи ДНК или РНК (часто 10-25 нуклеотидов), которые комплементарны данной целевой последовательности, часто используются для определения местоположения мишени. Перекрытие определяет разрешение обнаруживаемых функций. Например, если целью эксперимента является обнаружение точки останова транслокации , то перекрытие зондов - степень, в которой одна последовательность ДНК содержится в соседних зондах - определяет минимальное окно, в котором может быть обнаружена точка останова. .

Сочетание последовательностей зондов определяет тип функции, которую зонд может обнаружить. Зонды, которые гибридизуются по всей хромосоме, используются для подсчета количества определенной хромосомы, выявления транслокаций или идентификации внехромосомных фрагментов хроматина . Это часто называют «окраской целых хромосом». Если использовать все возможные зонды, каждая хромосома (весь геном) будет помечена флуоресцентно, что не будет особенно полезно для определения характеристик отдельных последовательностей. Однако можно создать смесь зондов меньшего размера, которые специфичны для определенной области (локуса) ДНК; эти смеси используются для обнаружения делеционных мутаций. В сочетании с определенным цветом смесь зондов, специфичных для локуса, используется для обнаружения очень специфических транслокаций. Для подсчета хромосом часто используются специальные смеси локус-специфичных зондов путем связывания с центромерными областями хромосом, которые достаточно различимы для идентификации каждой хромосомы (за исключением хромосомы 13 , 14 , 21 , 22 ).

В ряде других методов используются смеси зондов разного цвета. Может быть обнаружен диапазон цветов в смесях флуоресцентных красителей, поэтому каждая хромосома человека может быть идентифицирована по характерному цвету с использованием смесей полных хромосомных зондов и различных соотношений цветов. Хотя хромосом больше, чем легко различимые цвета флуоресцентных красителей, для создания вторичных цветов можно использовать соотношения смесей зондов . Подобно сравнительной геномной гибридизации , смесь зондов для вторичных цветов создается путем смешивания правильного соотношения двух наборов зондов разного цвета для одной и той же хромосомы. Этот метод иногда называют M-FISH.

Та же физика, которая делает возможным разнообразие цветов для M-FISH, может быть использована для обнаружения транслокаций. То есть кажется, что смежные цвета перекрываются; наблюдается вторичный цвет. Некоторые анализы разработаны таким образом, что вторичный цвет будет присутствовать или отсутствовать в интересующих случаях. Примером может служить обнаружение BCR / ABL.транслокации, где вторичный цвет указывает на болезнь. Этот вариант часто называют FISH двойного слияния или D-FISH. Противоположная ситуация - когда отсутствие вторичного цвета является патологическим - иллюстрируется анализом, используемым для исследования транслокаций, где только одна из точек останова известна или постоянна. Локус-специфические зонды сделаны для одной стороны точки останова и другой интактной хромосомы. В нормальных клетках наблюдается вторичный цвет, но при транслокации наблюдаются только основные цвета. Эту технику иногда называют «РЫБОЙ на части».

Одномолекулярная РНК FISH [ править ]

Одномолекулярная РНК FISH, также известная как Stellaris® RNA FISH, [11] - это метод обнаружения и количественного определения мРНК и других длинных молекул РНК в тонком слое образца ткани. Мишени могут быть надежно визуализированы путем нанесения нескольких коротких, однозначно меченных олигонуклеотидных зондов . [12] Связывание до 48 флуоресцентно меченых олигонуклеотидов с одной молекулой мРНК обеспечивает достаточную флуоресценцию для точного обнаружения и локализации каждой мРНК-мишени на широкоугольном флуоресцентном микроскопическом изображении. Зонды, не связывающиеся с намеченной последовательностью, не достигают достаточной локальной флуоресценции, чтобы отличить ее от фона . [13]

Одномолекулярные РНК FISH-анализы можно проводить в симплексном или мультиплексном режиме , и их можно использовать в качестве последующего эксперимента после количественной ПЦР или визуализировать одновременно с флуоресцентным анализом антител . Эта технология имеет потенциальное применение в диагностике рака , [14] нейробиологии , анализе экспрессии генов [15] и сопутствующей диагностике .

Fiber FISH [ править ]

В технике, альтернативной интерфазным или метафазным препаратам, волокна FISH, интерфазные хромосомы прикреплены к слайду таким образом, что они вытянуты по прямой линии, а не скручены плотно, как в обычном FISH, или занимают территорию хромосомы. конформация, как в интерфазе FISH. Это достигается путем приложения механического сдвига по длине предметного стекла либо к клеткам, которые были закреплены на предметном стекле и затем лизированы , либо к раствору очищенной ДНК. Для этой цели все чаще используется метод, известный как расчесывание хромосом . Расширенная конформация хромосом обеспечивает значительно более высокое разрешение - даже до нескольких килобаз.. Подготовка образцов волокна FISH, хотя концептуально проста, является довольно квалифицированным делом, и только специализированные лаборатории используют эту технику на регулярной основе. [ необходима цитата ]

Q-FISH [ править ]

Основная статья: Q-FISH

Q-FISH объединяет FISH с PNA и компьютерным программным обеспечением для количественной оценки интенсивности флуоресценции. Этот метод обычно используется при исследовании длины теломер .

Flow-FISH [ править ]

Основная статья: Flow-FISH

Flow-FISH использует проточную цитометрию для автоматического выполнения FISH с использованием измерений флуоресценции каждой клетки.

MA-FISH [ править ]

Микрожидкостный FISH ( MA-FISH ) использует микрожидкостный поток для повышения эффективности гибридизации ДНК, уменьшения потребления дорогостоящих зондов FISH и сокращения времени гибридизации. MA-FISH применяется для обнаружения гена HER2 в тканях рака груди. [16]

MAR-FISH [ править ]

Микроавторадиография FISH - это метод комбинирования радиоактивно меченых субстратов с обычным FISH для одновременного обнаружения филогенетических групп и метаболической активности.

Гибридный Fusion-FISH [ править ]

Hybrid Fusion FISH ( HF-FISH ) использует первичную аддитивную комбинацию возбуждения / испускания флуорофоров для генерации дополнительных спектров посредством процесса маркировки, известного как динамическая оптическая передача (DOT). Три первичных флуорофора способны генерировать в общей сложности 7 легко обнаруживаемых эмиссионных спектров в результате комбинаторной маркировки с использованием DOT. Hybrid Fusion FISH позволяет использовать много мультиплексные приложения FISH, предназначенные для панелей клинической онкологии. Технология предлагает более быструю оценку с помощью эффективных наборов зондов, которые можно легко обнаружить с помощью традиционных флуоресцентных микроскопов.

Медицинские приложения [ править ]

Часто родители детей с отклонениями в развитии хотят узнать больше о состоянии своего ребенка, прежде чем решат завести еще одного ребенка. Эти опасения могут быть решены путем анализа ДНК родителей и ребенка. В случаях, когда нарушение развития ребенка не выяснено, его причину потенциально можно определить с помощью FISH и цитогенетических методов. Примеры заболеваний, которые диагностированы с помощью FISH , включают синдром Прадера-Вилли , Angelman синдром , 22q13 делецией синдром , хронический миелолейкоз , острый лимфобластный лейкоз , CRI-дю-чат , синдром Velocardiofacial иСиндром Дауна . FISH на сперматозоидах показан мужчинам с аномальным соматическим или мейотическим кариотипом, а также мужчинам с олигозооспермией , поскольку примерно у 50% мужчин с олигозооспермией наблюдается повышенная частота хромосомных аномалий сперматозоидов. [17] Анализ хромосом 21, X и Y достаточен для выявления лиц с олигозооспермией в группе риска. [17]

В медицине FISH можно использовать для постановки диагноза , оценки прогноза или оценки ремиссии заболевания, например рака . Затем лечение может быть индивидуализировано. Традиционное обследование, включающее анализ метафазных хромосом, часто не может определить особенности, которые отличают одно заболевание от другого, из-за тонких хромосомных особенностей; FISH может прояснить эти различия. FISH также может использоваться для более легкого обнаружения больных клеток, чем стандартные цитогенетические методы.методы, которые требуют деления клеток и требуют трудоемкой ручной подготовки и анализа слайдов технологом. FISH, с другой стороны, не требует живых клеток и может быть определен автоматически, компьютер подсчитывает присутствующие флуоресцентные точки. Однако для того, чтобы различать тонкие различия в образцах полос на изогнутых и скрученных метафазных хромосомах, требуется обученный технолог. FISH может быть встроен в микрофлюидное устройство Lab-on-a-chip . Эта технология все еще находится в стадии разработки, но, как и другие методы лаборатории на кристалле, она может привести к созданию более портативных диагностических методов. [18] [19]

Общий процесс флуоресцентной гибридизации in situ (FISH), используемый для идентификации бактериальных патогенов. Сначала у пациента берут образец инфицированной ткани. Затем синтезируется олигонуклеотид, комплементарный генетическому коду предполагаемого патогена, и химически маркируется флуоресцентным зондом. Образец ткани химически обрабатывают, чтобы сделать клеточные мембраны проницаемыми для флуоресцентно меченного олигонуклеотида. Затем добавляется флуоресцентная метка, которая связывается только с комплементарной ДНК предполагаемого патогена. Если патоген присутствует в образце ткани, то клетки патогена будут флуоресцировать после обработки меченым олигонуклеотидом. Никакие другие клетки не светятся.

Идентификация видов [ править ]

FISH широко изучался как диагностический метод для идентификации патогенов в области медицинской микробиологии. [20] Хотя было доказано, что это полезный и применимый метод, он до сих пор не нашел широкого применения в диагностических лабораториях. Короткое время до диагностики (менее 2 часов) было большим преимуществом по сравнению с биохимической дифференциацией, но это преимущество оспаривается MALDI-TOF-MS, которая позволяет идентифицировать более широкий спектр патогенов по сравнению с методами биохимической дифференциации. Использование FISH в диагностических целях нашло свое предназначение, когда необходима немедленная идентификация видов, особенно для исследования культур крови, для которых FISH является дешевым и простым методом предварительной быстрой диагностики. [20]

FISH также можно использовать для сравнения геномов двух биологических видов , чтобы установить эволюционные отношения. Подобный метод гибридизации называется зоопарком . Бактериальные FISH-зонды часто являются праймерами для области 16s рРНК .

FISH широко используется в области микробной экологии для идентификации микроорганизмов . Биопленки , например, состоят из сложных (часто) многовидовых бактериальных организаций. Подготовка ДНК-зондов для одного вида и выполнение FISH с помощью этого зонда позволяет визуализировать распределение этого конкретного вида в биопленке. Подготовка зондов (двух разных цветов) для двух видов позволяет исследователям визуализировать / изучать совместную локализацию этих двух видов в биопленке и может быть полезна для определения тонкой архитектуры биопленки.

Сравнительная геномная гибридизация [ править ]

Сравнительная геномная гибридизация может быть описана как метод, который использует FISH параллельно со сравнением силы гибридизации, чтобы вспомнить любые серьезные нарушения в процессе дупликации последовательностей ДНК в геноме ядра. [21]

Виртуальный кариотип [ править ]

Виртуальное кариотипирование - еще одна экономически эффективная, клинически доступная альтернатива панелям FISH, использующим тысячи и миллионы зондов на одном массиве для обнаружения изменений числа копий в масштабе всего генома с беспрецедентным разрешением. В настоящее время этот тип анализа позволяет обнаруживать только прирост и потерю хромосомного материала и не обнаруживает сбалансированные перестройки, такие как транслокации и инверсии, которые являются отличительными отклонениями, наблюдаемыми при многих типах лейкемии и лимфомы.

Спектральный кариотип [ править ]

Спектральное кариотипирование - это изображение цветных хромосом. Спектральное кариотипирование включает в себя FISH с использованием нескольких форм многих типов зондов, в результате чего каждая хромосома маркируется через ее метафазную стадию. Этот тип кариотипирования используется специально при поиске расположения хромосом.

См. Также [ править ]

  • Тонкая структура эукариотической хромосомы
  • G полосы
  • Гибридизация in situ , метод, используемый для мечения
  • Хромогенная гибридизация in situ (CISH)
  • Молекулярная цитогенетика
  • Виртуальный кариотип
  • Картирование генов
  • Счастливое отображение

Галерея [ править ]

  • Еще одна схема процесса FISH.

  • Микрожидкостный чип, который снизил стоимость теста FISH на 90%.

  • Изображение двойной этикетки FISH; Бифидобактерии Cy3, Всего бактерий FITC.

  • Параспеклы визуализируются одномолекулярным FISH против NEAT1 (Quasar 570) в клетках U-2 OS (DAPI).

Ссылки [ править ]

  1. ^ Лангер-Сафер, PR; Левин, М .; Уорд, округ Колумбия (1982). «Иммунологический метод картирования генов на политенных хромосомах дрозофилы » . Труды Национальной академии наук . 79 (14): 4381–5. Bibcode : 1982PNAS ... 79.4381L . DOI : 10.1073 / pnas.79.14.4381 . PMC  346675 . PMID  6812046 .
  2. ^ Аманн, Рудольф; Фукс, Бернхард М. (2008). «Идентификация отдельных клеток в микробных сообществах с помощью улучшенных методов флуоресцентной гибридизации in situ». Обзоры природы микробиологии . 6 (5): 339–348. DOI : 10.1038 / nrmicro1888 . PMID 18414500 . S2CID 22498325 .  
  3. ^ Энтони, SJ; St. Leger, JA; Pugliares, K .; Ip, HS; Чан, JM; Карпентер, ZW; Наваррете-Масиас, I .; Санчес-Леон, М .; Салики, JT; Pedersen, J .; Karesh, W .; Daszak, P .; Rabadan, R .; Rowles, T .; Липкин, В.И. (2012). «Появление смертельного птичьего гриппа в гавани Новой Англии» . mBio . 3 (4): e00166 – e00112. DOI : 10,1128 / mBio.00166-12 . PMC 3419516 . PMID 22851656 .  
  4. ^ Everitt, AR; Clare, S .; Pertel, T .; Джон, ИП; Мытье, RS; Smith, SE; Подбородок, CR; Фили, EM; Sims, JS; Адамс, диджей; Мудрый, HM; Kane, L .; Goulding, D .; Digard, P .; Анттила, В .; Baillie, JK; Уолш, Т.С.; Хьюм, Д.А.; Palotie, A .; Xue, Y .; Colonna, V .; Тайлер-Смит, К .; Даннинг, Дж .; Гордон, SB; Everingham, K .; Dawson, H .; Надежда, Д .; Ramsay, P .; Уолш (местный ведущий исследователь), TS; и другие. (2012). «IFITM3 ограничивает заболеваемость и смертность, связанные с гриппом» . Природа . 484 (7395): 519–23. Bibcode : 2012Natur.484..519. . DOI : 10,1038 / природа10921 . PMC 3648786 . PMID  22446628 .
  5. ^ Louzada, S .; Adega, F .; Чавес, Р. (2012). «Определение линий опухолевых клеток молочной железы сестринских крыс HH-16 cl.2 / 1 и HH-16.cl.4 в качестве модели клеток in vitro для Erbb 2» . PLOS ONE . 7 (1): e29923. Bibcode : 2012PLoSO ... 729923L . DOI : 10.1371 / journal.pone.0029923 . PMC 3254647 . PMID 22253826 .  
  6. ^ Тинг, ДТ; Lipson, D .; Paul, S .; Бранниган, BW; Ахаванфард, С .; Коффман, EJ; Contino, G .; Deshpande, V .; Iafrate, AJ; Летовский, С .; Ривера, Миннесота; Bardeesy, N .; Maheswaran, S .; Габер, Д.А. (2011). «Аберрантная избыточная экспрессия спутниковых повторов при раке поджелудочной железы и других эпителиальных раках» . Наука . 331 (6017): 593–6. Bibcode : 2011Sci ... 331..593T . DOI : 10.1126 / science.1200801 . PMC 3701432 . PMID 21233348 .  
  7. ^ Чжан, Б .; Arun, G .; Mao, YS; Лазарь, З .; Hung, G .; Bhattacharjee, G .; Сяо, X .; Бут, CJ; Wu, J .; Zhang, C .; Спектор, Д.Л. (2012). «LncRNA Malat1 незаменима для развития мышей, но ее транскрипция играет цис-регулирующую роль у взрослых» . Сотовые отчеты . 2 (1): 111–23. DOI : 10.1016 / j.celrep.2012.06.003 . PMC 3408587 . PMID 22840402 .  
  8. ^ Ли, К .; Kunkeaw, N .; Jeon, SH; Lee, I .; Johnson, BH; Канг, Г. -Ю .; Bang, JY; Парк, HS; Leelayuwat, C .; Ли, Ю.С. (2011). «Предшественник miR-886, новая некодирующая РНК, репрессированная при раке, связывается с PKR и модулирует ее активность» . РНК . 17 (6): 1076–89. DOI : 10,1261 / rna.2701111 . PMC 3096040 . PMID 21518807 .  
  9. ^ a b c Бернаскони, B .; Karamitopolou-Diamantiis, E .; Торнилло, Л .; Lugli, A .; Di Vizio, D .; Dirnhofer, S .; Wengmann, S .; Glatz-Krieger, K .; Fend, F .; Capella, C .; Insabato, L .; Терраччано, Л. М. (2008). «Хромосомная нестабильность в лимфомах лимфоидной ткани, связанных со слизистой оболочкой желудка: флуоресцентное исследование гибридизации in situ с использованием подхода тканевых микроматриц». Патология человека . 39 (4): 536–42. DOI : 10.1016 / j.humpath.2007.08.009 . PMID 18234275 . 
  10. ^ Haroon, Мохамед Ф .; Скеннертон, Коннор Т .; Стин, Джейсон А .; Лахнер, Нэнси; Гугенгольц, Филип и Тайсон, Джин В. (2013). «Глава первая - флуоресцентная гибридизация in situ в растворе и активированная флуоресценцией сортировка клеток для восстановления единичных клеток и популяционного генома». В Ф. Делонг Эдвард (ред.). Методы в энзимологии . 531 . Академическая пресса. С. 3–19.
  11. ^ Orjalo, Артуры. Jr .; Йоханссон, HansE. (01.01.2016). Фэн, Йи; Чжан, Линь (ред.). Stellaris® РНК-флуоресцентная гибридизация in situ для одновременного обнаружения незрелых и зрелых длинных некодирующих РНК в прикрепленных клетках . Методы молекулярной биологии. 1402 . Springer Нью-Йорк. С. 119–134. DOI : 10.1007 / 978-1-4939-3378-5_10 . ISBN 9781493933761. PMID  26721487 .
  12. ^ Raj, A .; Van Den Bogaard, P .; Рифкин, С.А.; Van Oudenaarden, A .; Тяги, С. (2008). «Визуализация отдельных молекул мРНК с использованием нескольких зондов с одной меткой» . Природные методы . 5 (10): 877–9. DOI : 10.1038 / nmeth.1253 . PMC 3126653 . PMID 18806792 .  
  13. ^ Biosearch Technologies подписывает эксклюзивную лицензию на технологию Single Molecule FISH от UMDNJ . biosearchtech.com
  14. ^ Cagir, B .; Гельманн, А .; Park, J .; Fava, T .; Танкелевич, А .; Биттнер, EW; Уивер, EJ; Палаццо, Япония; Вайнберг, Д .; Фрай, RD; Вальдман, С.А. (1999). «Новый тест на рецидив рака толстой кишки». Анналы внутренней медицины . 131 (11): 805–12. DOI : 10.7326 / 0003-4819-131-11-199912070-00024 . PMID 10610624 . 
  15. ^ Kosman, D .; Mizutani, CM; Лимоны, D; Cox, WG; Макгиннис, Вт; Бир, Э (2004). «Мультиплексное обнаружение экспрессии РНК в эмбрионах дрозофилы». Наука . 305 (5685): 846. DOI : 10.1126 / science.1099247 . PMID 15297669 . S2CID 26313219 .  
  16. ^ Nguyen HT, Trouillon R, Matsuoka S, Fiche M, de Leval L, Bisig B и др. (Янв 2017). «Микрожидкостная флюоресценция in situ гибридизация для преимущественной оценки рецептора 2 эпидермального фактора роста человека при раке груди» . Lab Invest . 97 (1): 93–103. DOI : 10.1038 / labinvest.2016.121 . PMID 27892928 . 
  17. ^ a b Sarrate, Z .; Vidal, F .; Бланко, Дж. (2010). «Роль исследований флуоресцентной гибридизации сперматозоидов in situ у бесплодных пациентов: показания, подход к исследованию и клиническая значимость». Фертильность и бесплодие . 93 (6): 1892–902. DOI : 10.1016 / j.fertnstert.2008.12.139 . PMID 19254793 . 
  18. ^ Курц, CM; vd Moosdijk, S .; Thielecke, H .; Фельтен, Т. (2011). «На пути к платформе клеточного многопараметрического анализа: флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) на микросхемах с матрицами микроотверстий». 2011 Ежегодная международная конференция общества инженеров IEEE в медицине и биологии . Материалы конференции: ... Ежегодная международная конференция общества инженеров IEEE в медицине и биологии. IEEE Engineering in Medicine and Biology Society. Ежегодная конференция . 2011 . С. 8408–11. DOI : 10.1109 / IEMBS.2011.6092074 . ISBN 978-1-4577-1589-1. PMID  22256298 . S2CID  4955677 .
  19. ^ Dill, K .; Hui Liu, R .; Гродзинский, П. (2008). Микроматрицы: подготовка, микрофлюидика, методы обнаружения и биологические применения . Springer. п. 323. ISBN 978-0387727165.
  20. ^ a b Фрикманн, Хаген; Заутнер, Андреас Эрих; Мотер, Аннет; Кихней, Юдифь; Хаген, Ральф Матиас; Стендер, Хенрик; Попперт, Свен (2017-05-04). «Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) в рутинной микробиологической диагностической лаборатории: обзор» . Критические обзоры в микробиологии . 43 (3): 263–293. DOI : 10.3109 / 1040841X.2016.1169990 . ISSN 1040-841X . 
  21. ^ «Сравнительная геномная гибридизация» . Словарь научных и технических терминов Макгроу-Хилла . Проверено 19 сентября 2013 года .

Дальнейшее чтение [ править ]

  • Пернталер А, Пернталер Дж, Аманн Р. (2002). «Гибридизация флуоресценции in situ и катализируемое осаждение репортера для идентификации морских бактерий» . Прикладная и экологическая микробиология . 68 (6): 3094–3101. DOI : 10,1128 / AEM.68.6.3094-3101.2002 . PMC  123953 . PMID  12039771 .
  • Вагнер М, Хорн М, Даймс Х (2003). «Гибридизация флуоресценции in situ для идентификации и характеристики прокариот». Текущее мнение в микробиологии . 2003 (6): 302–309. DOI : 10.1016 / S1369-5274 (03) 00054-7 . PMID  12831908 .
  • Карти, JD (1965). Точки зрения в биологии . Англия: Butterworth & Co., стр. 66.

Внешние ссылки [ править ]

  • Флуоресцентный + in + situ + гибридизация в Национальной медицинской библиотеке США по медицинским предметным рубрикам (MeSH)
  • Информация о волокне FISH от Olympus Corporation
  • Руководство по волоконно - FISH от Октавиана Henegariu
  • Протокол Fiber FISH от проекта "Геном человека" в Центре Сэнгера
  • CARD-FISH, BioMineWiki
  • Подготовка наборов сложных ДНК-зондов для 3D FISH с использованием до шести различных флуорохромов
  • Технические примечания и протоколы FISH от GeneDetect.com
  • Флуоресценция in situ Гибридизация Фотографии бактерий
  • Рациональный дизайн смесей полинуклеотидных зондов для идентификации конкретных генов в определенных таксонах: www.dnaBaser.com/PolyPro