Из Википедии, бесплатной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску
Не путать с тестом Клейхауэра – Бетке , который также часто называют «тестом КБ».
Метод диско-диффузионного агара проверяет эффективность антибиотиков на конкретный микроорганизм. В чашку с агаром сначала насыпают бактерии, затем поверх нее кладут бумажные диски с антибиотиками. Затем бактериям дают возможность расти на агаризованной среде, а затем наблюдают за ростом и влиянием антибиотика на нее. Количество места вокруг каждого диска с антибиотиком указывает на летальность этого антибиотика для рассматриваемых бактерий. Высокоэффективные антибиотики (диск C) образуют широкое кольцо без роста бактерий, в то время как неэффективный антибиотик (диск A) вообще не изменяет концентрацию окружающих бактерий. Эффективность промежуточных антибиотиков (диск B) можно измерить с помощью зоны их ингибирования. Этот метод используется для определения наилучшего антибиотика для лечения нового или устойчивого к лекарствам патогена.

Тест диффузии диска , или агар - тест диффузии , или тест Кирби-Бауэра (диск-диффузии Тест на чувствительность к антибиотикам, диско-диффузионный тест чувствительности к антибиотикам, KB тест), представляет собой антибиотик Тест на чувствительность. Он использует диски с антибиотиками, чтобы проверить степень воздействия этих антибиотиков на бактерии. В этом тесте вафли, содержащие антибиотики, помещают на чашку с агаром, куда были помещены бактерии, и оставляют чашку для инкубации. Если антибиотик останавливает рост бактерий или убивает бактерии , вокруг пластины останется область, где бактерии не разрослись настолько, чтобы их можно было увидеть. [1] [2] Это называется зоной торможения.

Размер этой зоны зависит от многих факторов, одним из которых является то, насколько эффективен антибиотик в остановке роста бактерий. Другой фактор, который будет влиять на размер зоны, - это диффузия антибиотика в агаризованной среде, которая зависит от молекулярной конфигурации антибиотика. После измерения диаметра зоны его необходимо сравнить с базой данных стандартов зон, чтобы определить, является ли изучаемая бактерия восприимчивой, умеренно чувствительной или устойчивой к рассматриваемому антибиотику.

Чистую бактериальную культуру суспендируют в буфере, стандартизируют по мутности и равномерно наносят мазками на культуральный планшет. Затем на поверхность агара помещают диск из фильтровальной бумаги, пропитанный исследуемым соединением. Соединение диффундирует из фильтровальной бумаги в агар. Концентрация соединения будет максимальной рядом с диском и будет уменьшаться по мере удаления от диска. Если соединение эффективно против бактерий при определенной концентрации, никакие колонии не будут расти там, где концентрация в агаре больше или равна эффективной концентрации. Это зона торможения. Это вместе со скоростью распространения антибиотика используется для оценки чувствительности бактерий к этому конкретному антибиотику. В общем, большие зоны коррелируют с меньшимиминимальная ингибирующая концентрация (МПК) антибиотика для этих бактерий. Ингибирование, вызванное тестом, сравнивают с ингибированием, вызванным известной концентрацией эталонного соединения. Эта информация может быть использована для выбора подходящих антибиотиков для борьбы с конкретной инфекцией. [3]

Стандартизация [ править ]

Подробный взгляд на результаты теста диффузии в агаре.

Инокуляцию проводят бульонной культурой, разбавленной до стандарта мутности 0,5 по Макфарланду , что примерно эквивалентно 150 миллионам клеток на мл.

Тест Кирби-Бауэра: белые вафли, содержащие антибиотики, показаны на пластине с бактериями . Некоторые вафли окружены кружками, в которых наблюдается недостаточный рост бактерий, что указывает на чувствительность к антибиотику.

Подготовка [ править ]

Все аспекты процедуры Кирби-Бауэра стандартизированы для обеспечения последовательных и точных результатов. По этой причине лаборатория должна придерживаться этих стандартов. Среда, используемая в тестировании Кирби-Бауэра, должна представлять собой агар Мюллера-Хинтона глубиной всего 4 мм, залитый в чашки Петри диаметром 100 или 150 мм. Уровень pH агара должен быть от 7,2 до 7,4.

Процедура инкубации [ править ]

  1. Используя асептическую технику , поместите стерильный тампон в бульонную культуру определенного организма, а затем аккуратно удалите лишнюю жидкость, осторожно нажав или повернув тампон внутрь пробирки.
  2. Используя тампон, нанесите штрих на чашку агара Мюллера-Хинтона, чтобы образовалась бактериальная лужайка.
    • Чтобы добиться равномерного роста, нанесите штрих тампоном в одном направлении, поверните планшет на 90 ° и снова нанесите штрих в этом направлении.
    • Повторите это вращение 3 раза.
  3. Дайте пластине высохнуть примерно 5 минут.
  4. Используйте дозатор дисков с антибиотиками, чтобы распределить диски, содержащие определенные антибиотики, на тарелку.
  5. С помощью стерилизованных в пламени пинцета осторожно прижмите каждый диск к агару, чтобы убедиться, что диск прикреплен к агару.
  6. Планшеты следует инкубировать в течение ночи при температуре инкубации 37 ° C (98,6 ° F). [4]
На чашках Петри видны зоны ингибирования различными экстрактами, такими как петролейный эфир, хлороформ, этанол и ацетон [5]

Метод чашки оксфордского пенициллина [ править ]

Диски, содержащие увеличивающиеся концентрации антибиотиков, помещают на засеянный бактериальный газон на поверхности агара и инкубируют чашки. Размеры зоны измеряются от края диска до конца чистой зоны. Интерпретация более сложна в популяциях со смешанной восприимчивостью ( см. BSAC ). Они отображаются в виде линейных размеров или квадратов расстояний в зависимости от натурального логарифма концентрации антибиотика в дисках. MIC определяется из нулевой точки пересечения с данными линейной регрессии ( см. Agardiffusion.com ). Сам перехват - это логарифм ВПК. Наклон линии регрессии связан с коэффициентом диффузии этого конкретного антибиотика в агаре. [6]

См. Также [ править ]

  • Etest

Дальнейшее чтение [ править ]

  • Бауэр, Альфред В. (1 августа 1959 г.). «Однодисковое тестирование стафилококков на чувствительность к антибиотикам». Архивы внутренней медицины . 104 (2): 208–16. DOI : 10,1001 / archinte.1959.00270080034004 . PMID  13669774 .
  • Бауэр, AW; Кирби, ВМ; Шерис, JC; Терк, М. (апрель 1966 г.). «Тестирование чувствительности к антибиотикам стандартным методом с одним диском». Американский журнал клинической патологии . 45 (4): 493–6. DOI : 10.1093 / ajcp / 45.4_ts.493 . PMID  5325707 .
  • Бауэр, AW; Кирби, ВМ; Шерис, JC; Терк, М. (март 1966 г.). «Тестирование чувствительности к антибиотикам стандартным методом с одним диском». Технический бюллетень реестра медицинских технологов . 36 (3): 49–52. PMID  5908210 .

Ссылки [ править ]

  1. ^ "Бактериальное освещение" (PDF) . Проверено 24 мая 2013 .
  2. ^ Коричневый DF, Kothari D (1975). «Сравнение дисков с антибиотиками из разных источников» . J. Clin. Патол . 28 (10): 779–83. DOI : 10.1136 / jcp.28.10.779 . PMC 475859 . PMID 1214010 .  
  3. ^ Моханти, А. (2010): Физиохимическое и антимикробное исследование многотравья. Pharmacie globale. Vol. 4 (4) 1-3.
  4. ^ "Архивная копия" . Архивировано из оригинала на 2013-07-31 . Проверено 1 сентября 2013 .CS1 maint: заархивированная копия как заголовок ( ссылка )
  5. ^ Саху Б.К., Антимикробные свойства надземной части Sesbania grandiflora (Linn.), Фармацевтический колледж Барпали, Индия, * th semester Project 2013
  6. ^ Бонев, B; Хупер, Дж; Паризо, Дж (июнь 2008 г.). «Принципы оценки чувствительности бактерий к антибиотикам методом диффузии в агаре» . Журнал антимикробной химиотерапии . 61 (6): 1295–301. DOI : 10,1093 / JAC / dkn090 . PMID 18339637 .