Пятно лейшмана

Пятно Лейшмана, показывающее шизонтальную стадию малярийного паразита Plasmodium vivax

Окраска Лейшмана , также известная как окраска Лейшмана , используется в микроскопии для окрашивания мазков крови . Обычно он используется для дифференциации и идентификации лейкоцитов , малярийных паразитов и трипаносом . Он основан на метанольной смеси «полихромированного» метиленового синего (то есть деметилированного в различные лазурные) и эозина.. Базовый раствор в метаноле стабилен и также служит для непосредственной фиксации мазка без предварительного этапа. Если рабочий раствор приготовить путем разбавления водным буфером, полученная смесь очень нестабильна и не может использоваться долгое время. Пятно Лейшмана названо в честь его изобретателя, шотландского патолога Уильяма Буг Лейшмана . Это вариант окраски Романовского , и, таким образом , аналогично и частично заменен по Гимзу , краситель Дженнер , и пятнами Райта .

Подготовка и хранение [ править ]

Многие компании продают Leishman Stain в виде сухого порошка, который позже восстанавливается метанолом . ^[1] Тепло и яркий свет окисляют пятно и вызывают выпадение нерастворимых осадков, таких как метиленовый фиолетовый (Bernthsen) или соли эозината лазурь. ^[2]

Преимущества и недостатки [ править ]

Этот раздел написан как личное размышление, личное эссе или аргументированное эссе , в котором излагаются личные чувства редактора Википедии или представлены оригинальные аргументы по теме. Пожалуйста, помогите улучшить его , переписав в энциклопедическом стиле . ( Январь 2019 г. ) ( Узнайте, как и когда удалить этот шаблон сообщения )

Преимущества [ править ]

Согласно учебнику сэра Джона Вивиана Дейси « Практическая гематология» , «Среди используемых в настоящее время красителей по Романовскому, окраска Дженнера - самая простая, а окраска Гимзы - самая сложная. Краситель Лейшмана, занимающий промежуточное положение, до сих пор широко используется в рутинном окрашивании».

В протоколе ВОЗ ^[3] упоминается:

Существует ряд различных комбинаций этих красителей, которые различаются по своим характеристикам окрашивания. Май-Грюнвальд-Гимза - хороший метод для повседневной работы. Окрашивание Райта - более простой метод, в то время как Окрашивание Лейшмана также является простым методом, который особенно подходит, когда срочно требуется мазок окрашенной крови или если обычное окрашивание недоступно (например, ночью). Окрашивание Филда - это быстрое окрашивание, используемое в основном на тонких пленках для малярийных паразитов. Какой бы метод ни использовался, важно выбирать красители, не загрязненные другими красителями или солями металлов.

Сэр Уильям Буг Лейшман из Лондона и Карл Рейтер из Германии независимо друг от друга открыли в 1901 году то, что считается «возможно, наиболее практичными модификациями пятен Малаховского» ^[4]. Они переняли лучшие черты красок, разработанных Малаховски и Дженнером, т. Е. Использовали оба вида красок. полихромированный метиленовый синий (случайно сделанный Романовским, получившим такое имя, систематически выполняемый Эрнстом Малаховски еще до Романовского и заново открытый Бернхардом Нохтом, но неизвестно Дженнеру, Мэй, Грюнвальду и многим другим, кто использовал простой метиленовый синий) и фильтрации осадка лазурного эозината из водной смеси и повторного растворения в спиртовом растворителе (мудрость Дженнера). Различия между методами Лейшмана и Рейтера заключались в следующем: Лейшман использовал метанол (как и Дженнер) и заменил эозин B на эозин Y, тогда как Рейтер использовал этиловый спирт и справедливо подчеркнул важность использования абсолютно чистого растворителя. Оба метода дали стойкое пятно желаемого пурпурного цвета.

Хорошая контрастность [ править ]

Окрашивание Лейшмана обычно показывает ярко-фиолетовый цвет ядра и гранул нейтрофилов, для чего становится удобнее дифференциальный подсчет и качество окрашивания лучше, чем при окрашивании на основе простого метиленового синего и эозина, которые не создают достаточного контраста между цитоплазмой и ядро. Поскольку Лейшман, как и другие красители по Романовскому, лучше окрашивает детали цитоплазмы и гранулы, гематологи обычно предпочитают их (однако о цитологах см. Ниже). По сравнению с дорогостоящими и токсичными чистыми синтетическими реагентами на основе AZure B и Eosin Y, используемыми эталонными методами ICSH, которые также не лишены недостатка в виде окисления и, в конечном итоге, получения серого тона вместо оптимального синего цвета для цитоплазмы,Лейшман - дешевый, легко доступный и простой в использовании метод, который дает довольно приемлемый контраст.^{[ необходима цитата ]}

Хорошая чувствительность к малярийным паразитам [ править ]

Было документально подтверждено, что окрашивание по Лейшману более чувствительно, чем окрашивание по Филду, и не хуже флуоресцентных красителей для обнаружения малярийных паразитов. ^[5]

Недостатки [ править ]

Сложность контроля молярного соотношения [ править ]

Состав полихромированного метиленового синего, смешанного с эозином, никогда не бывает так хорош, как непосредственно взвешенные и смешанные пропорции в красителях типа Гимза. Альберт Плен в 1890 г. ^[6] выяснил, что молярное соотношение основных и кислотных красителей должно быть увеличено с 2: 1 до 3: 1, однако со времен Дженнерса (1899 г.) использование кристаллов лазурного эозината вернуло это соотношение. до неудовлетворительного 2: 1 и глубина цвета стала меньше. Это была только работа Густава Гимзы.и им подобные, которые снова вручную контролировали пропорцию этих двух компонентов, которая вернула глубину окрашивания. Однако Гимза и другие, кто искусственно контролировал пропорцию, иногда доходили до другой крайности (большой молярный избыток лазурного до соотношения 16,1), что, вероятно, было ненужным. на ICSH оптимальное соотношение составляет 6,5 к 7,3. ^[7]

Нестабильность [ править ]

Окрашивание Лейшмана при восстановлении с помощью буфера становится очень нестабильным (в отличие от красителей Гимза, которые относительно более стабильны из-за глицерина, или эталонных красителей ICSH, которые используют метанол + ДМСО в соотношении 6: 4 об. / Об.) И начинает осаждаться и требует повторной фильтрации. . При отсутствии тщательного контроля водопоглощение, испарение метанола из открытого контейнера и повторная фильтрация изменяют состав и требуют частой смены, что делает этот метод расточительным. Если не фильтровать, осадок на мазке можно принять за тромбоциты. Важно не встряхивать флакон с красителем перед использованием, иначе осевший осадок будет ресуспендирован и осядет на пленке во время окрашивания, что вызовет многочисленные артефакты и затруднит микроскопию. ^{[ необходима цитата ]}

Цитоплазматический контраст хороший, но ядерный контраст не так хорош, как H&E [ править ]

Как и все другие методы Малаховского-Романовского-Гимзы, он со временем тускнеет и не может храниться в стабильном архиве надолго. Также его вышеуказанные аналоги окрашивают ядра в темно-пурпурный цвет, и детали ядерных свойств не так ясны, как гематоксилен и эозин , которые, таким образом, предпочитают некоторые цитопатологи. Но в этом случае это дополнительный метод (поскольку он окрашивает детали цитоплазмы, гранулы и т. Д. Лучше, чем окрашивание H&E ). ^{[ необходима цитата ]}

Ссылки [ править ]