Эмбриональные фибробласты мыши (MEF) представляют собой тип фибробластов, полученных из эмбриона мыши . MEF демонстрируют веретеновидную форму при культивировании in vitro , что является типичной особенностью фибробластов. MEF - это ограниченная клеточная линия. После нескольких передач MEF стареют и, наконец, отмирают. Тем не менее, исследователи могут использовать несколько стратегий, таких как вирусная инфекция или повторная передача, чтобы увековечить MEF-клетки, что может позволить MEF расти бесконечно, несмотря на некоторые изменения в характеристиках. [1] [2]
MEF широко используются в биологических исследованиях, особенно в биологии стволовых клеток .
Подготовка и культура [ править ]
Для приготовления MEF необходимы беременные самки мышей. После принесения в жертву мыши исследователь должен разрезать живот самки мыши, а затем отделить эмбрион от плаценты в защитном кожухе. Затем следует вынуть печень и голову. Наконец, переваривайте остатки ферментами, чтобы получить отдельные изолированные клетки и культивировать клетки в чашках для культивирования тканей . Клетки MEF можно культивировать in vitro в среде DMEM с 10% FBS . Чтобы передать MEF, исследователи должны использовать трипсин для переваривания клеток (заставляя их отделяться от поверхности) и передачи 1/5 переваренных клеток в новую чашку. [3] [1]
Применение в биологии [ править ]
В 1962 году Джордж Тодаро и Ховард Грин, два исследователя из Нью-Йоркского университета , увековечили MEF путем повторной передачи. Эти клетки превратились в широко используемую клеточную линию NIH 3T3 . [4]
MEF, обработанные митомицином или гамма-лучами (такая обработка останавливает митоз MEF ), широко используются в качестве питателя в культуре эмбриональных стволовых клеток, поскольку они могут имитировать микросреду в эмбрионе. [5] В 2006 году Шинья Яманака перепрограммировал MEF в iPSC , введя 4 фактора, что примечательно для развития биологии стволовых клеток. [6]
См. Также [ править ]
Ссылки [ править ]
- ^ а б Цзянь-мин Сюй (2005). «Подготовка, культура и иммортализация эмбриональных фибробластов мыши». Текущие протоколы в молекулярной биологии . 28 (1): 1–8.
- ^ Мелисса М. Сент-Аманд; Джон А. Хановер2; Джозеф Шилоач1 (2016). «Сравнение стратегий иммортализации эмбриональных фибробластов мыши». J Biol Methods . 3 (2): e41.
- ^ LANCTÔT. «ПРИГОТОВЛЕНИЕ И ЗАМОРАЖИВАНИЕ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ ФИБРОБЛАСТОВ МЫШИ» (PDF) . Лаборатория LANCTÔT, Массачусетский технологический институт. [ постоянная мертвая ссылка ]
- ^ Тодаро ГДж, ЗЕЛЕНЫЙ Н (1963). «Количественные исследования роста клеток эмбриона мыши в культуре и их развития в установленные линии» . J. Cell Biol . 17 (2): 299–313. DOI : 10,1083 / jcb.17.2.299 . PMC 2106200 . PMID 13985244 .
- ^ Regad Т, Сейерс Т, Р Рис, ред. (2015). Принципы биологии стволовых клеток и рака: будущее применение и терапия . Джон Вили и сыновья. С. 3–5. ISBN 978-1-118-67062-0.
- ^ Kazutoshi Такахаши, Яманака (2006-08-25). «Индукция плюрипотентных стволовых клеток из эмбриональных и взрослых культур фибробластов мыши с помощью определенных факторов». Cell . 126 (4): 663–676. DOI : 10.1016 / j.cell.2006.07.024 . hdl : 2433/159777 . PMID 16904174 .
