Аффитины [1] [2] (коммерческое название нанофитины ) - это искусственные белки, обладающие способностью избирательно связывать антигены . Они структурно происходят из ДНК- связывающего белка Sac7d , обнаруженного у Sulfolobus acidocaldarius , микроорганизма, принадлежащего к домену архей . Путем рандомизации аминокислот на связывающей поверхности Sac7d и подвергания полученной библиотеки белков циклам рибосомного отображения аффинность может быть направлена на различные мишени, такие как пептиды , белки, вирусы и бактерии. [3][4] Аффитины являются миметиками антител и разрабатываются в качестве альтернативы антителам в качестве инструментов в биотехнологии . Они также использовались в качестве специфических ингибиторов различных ферментов. [ необходима цитата ] Аффитины можно использовать в методах биохимической очистки, в частности, в аффинной хроматографии. Способность Affitins избирательно связывать антигены используется для нацеливания на определенные белки. Ученые смогли очистить человеческий иммуноглобулин G (hIgG), бактериальный белок PulD и лизоцим куриных яиц, используя колонки Affitin с высокой степенью чистоты. [5]Они обладают способностью действовать как специфические лиганды для представляющих интерес белков, которые необходимы, когда слияние белков с полипептидными метками невозможно или не дает преимуществ, и, таким образом, строить аффинные колонки, как в случае производства биофармацевтических препаратов. Они были иммобилизованы на агарозной матрице, и колонки обладали высокой степенью селективности. В дополнение к этому антитела и неиммуноглобиновые белки могут быть очищены с использованием аффитинов с помощью аффинной хроматографии. [6] Из-за их небольшого размера и высокой растворимости их можно легко производить в больших количествах с использованием бактериальных экспрессионных систем.
Свойства [ править ]
 | Этот раздел содержит контент, который написан как реклама . ( Апрель 2020 г. ) ( Узнайте, как и когда удалить этот шаблон сообщения ) |
Аффитины состоят из 66 аминокислот и имеют молекулярную массу около 7 кДа , что мало по сравнению с антителами примерно 130–150 кДа. Полученные из термофильного организма, они являются необычайно термостойкими белками. Кроме того, аффитины долговечны - они способны выдерживать множество циклов очистки. [ необходимая цитата ] В отличие от антител, аффитины производятся in vitro и поэтому могут быть произведены быстрее. [3] Из-за их небольшого размера и высокой растворимости их можно легко производить в больших количествах с использованием бактериальных экспрессионных систем.
Аффитины - это сильно модифицированные реагенты, которые являются экстремофильными, поскольку они обнаружены в архях, таких как Sac7d, гипертерстабильный белок. Это искусственно связывающие белки с высоким сродством, небольшим размером и низкой структурной сложностью. У них есть два разных режима связывания. Один требует ровной поверхности, тогда как второй способ связывания требует плоской поверхности и двух коротких петель. Они являются термостойкими и химически стабильными реагентами, и их стабильность можно дополнительно повысить с помощью методов мутации или прививки. Другие методы их стабилизации включают использование элементов последовательности из других белков, принадлежащих к тому же семейству, переключение поверхности связывания и, таким образом, более длительную связывающую способность. Это было сделано путем трансплантации связывающей поверхности D1Sac7d на Sso7d, который является более стабильным,и путем введения точечных мутаций, ранее идентифицированных как стабилизирующие для WT Sso7d.[7]
Подводя итог, можно сказать, что Affitins - идеальные реагенты для аффинной хроматографии, потому что они долговечны, высокоселективны, экономичны, устойчивы к экстремально щелочному pH и химически и термически стабильны. Они также играют важную роль в биотехнологических и клинических применениях. Использование аффитина обеспечивает важные и полезные методы для анализа структуры белка in vivo и in vitro.
Ссылки [ править ]
- ^ Корреа, А; Пачеко, S; Мечалы, АЕ; Обал, G; Бехар, G; Мурату, B; Oppezzo, P; Альзари, PM; Пекорари, Ф (2014). «Мощное и специфическое ингибирование гликозидаз небольшими искусственными связывающими белками (аффитинами)» . PLOS ONE . 9 (5): e97438. Bibcode : 2014PLoSO ... 997438C . DOI : 10.1371 / journal.pone.0097438 . PMC 4019568 . PMID 24823716 .
- ^ Пачеко, S; Бехар, G; Maillasson, M; Мурату, B; Пекорари, Ф (2014). «Перенос аффинности к экстремофильному белку Sac7d архей путем вставки CDR» . Проектирование и отбор протеинов . 27 (10): 431–8. DOI : 10,1093 / белок / gzu042 . PMID 25301962 .
- ^ а б Мурату, Б; Шеффер, Ф; Guilvout, I; Tello-Manigne, D; Пагсли, AP; Альзари, PM; Пекорари, Ф (2007). «Ремоделирование ДНК-связывающего белка в качестве специфического ингибитора бактериального секретина PulD in vivo» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 104 (46): 17983–8. Bibcode : 2007PNAS..10417983M . DOI : 10.1073 / pnas.0702963104 . PMC 2084283 . PMID 17984049 .
- ^ Крехенбринк, М; Чами, М; Guilvout, I; Альзари, PM; Pécorari, F; Пагсли, AP (2008). «Искусственные связывающие белки (аффитины) как зонды конформационных изменений секретина PulD». Журнал молекулярной биологии . 383 (5): 1058–68. DOI : 10.1016 / j.jmb.2008.09.016 . PMID 18822295 .
- ^ Бехар, Гислен; Ренодон-Корньер, Аксель; Мурату, Барбара; Пекорари, Фредерик (2016). «Аффитины как надежные адаптированные реагенты для очистки антител и неиммуноглобулиновых белков с помощью аффинной хроматографии» . Журнал хроматографии A . 1441 : 44–51. DOI : 10.1016 / j.chroma.2016.02.068 . PMID 26952369 .
- ^ Беар, Г., Renodon-Cornière, А., Mouratou, Б., & Pecorari, Ф. (2016). Аффитины как надежные адаптированные реагенты для очистки антител и неиммуноглобулиновых белков с помощью аффинной хроматографии. Журнал хроматографии А, 1441, 44-51.
- ^ Беар, Г., Пачеко, С., Maillasson, М., Mouratou, Б., & Pecorari, Ф. (2014). Переключение сайта связывания анти-IgG между экстремофильными белками архей приводит к появлению аффитинов с повышенной стабильностью pH. Журнал биотехнологии, 192, 123-129.
