Микроматрица антител (также известная как матрица антител ) представляет собой специфическую форму белковой микроматрицы . В этой технологии совокупность захваченных антител наносится и фиксируется на твердой поверхности, такой как стекло, пластик, мембрана или силиконовый чип, и определяется взаимодействие между антителом и его антигеном-мишенью. Микроматрицы антител часто используются для обнаружения экспрессии белков в различных биожидкостях, включая сыворотку, плазму и лизаты клеток или тканей. Массивы антител можно использовать как для фундаментальных исследований, так и для медицинских и диагностических целей. [1] [2] [3] [4]
Задний план
Концепция и методология микрочипов антител были впервые представлены Цзе Вэнь Чангом в 1983 году в научной публикации [5] и серии патентов [6] [7] [8], когда он работал в Centocor в Малверне, штат Пенсильвания . Чанг ввел термин «матрица антител» и обсудил «массив» мельчайших пятен антител на небольших стеклянных или пластиковых поверхностях. Он продемонстрировал, что сетка пятен антител размером 10 × 10 (всего 100) и 20 × 20 (всего 400) может быть размещена на поверхности размером 1 × 1 см. Он также подсчитал, что если антитело покрыто оболочкой с концентрацией 10 мкг / мл, которая является оптимальной для большинства антител, 1 мг антитела может образовывать 2000000 точек диаметром 0,25 мм. Изобретение Чанга сосредоточено на использовании микроматриц антител для обнаружения и количественной оценки клеток, несущих определенные поверхностные антигены, такие как антигены CD и аллотипические антигены HLA, антигены в виде частиц, такие как вирусы и бактерии, и растворимые антигены. Принцип «одно нанесение образца, множественные определения», конфигурация анализа и механика для размещения впитывающих точек, описанные в документе и патентах, должны быть в целом применимы к различным типам микрочипов . Когда Цзе Вен Чанг и Нэнси Т. Чанг основали Tanox , Inc. в Хьюстоне, штат Техас, в 1986 году, они приобрели права на патенты на матрицу антител у Centocor как часть технологической базы для создания своего нового стартапа. Их первым разработанным продуктом был анализ, названный «иммуносорбентная цитометрия» [9], который можно было использовать для мониторинга иммунного статуса, то есть концентраций и соотношений CD3 + , CD4 + и CD8 + Т-клеток в крови. от ВИЧ -infected лиц.
Теоретические основы анализов связывания лигандов на основе белковых микрочипов получили дальнейшее развитие Роджер Экинс и его коллеги в конце 1980-х годов. [10] [11] [12] Согласно модели, микроматрицы антител не только позволят одновременный скрининг панели аналитов, но также будут более чувствительными и быстрыми, чем обычные методы скрининга. Интерес к скринингу больших наборов белков возник только в результате достижений в области геномики с помощью ДНК-микрочипов и проекта «Геном человека» .
Первые подходы к матрице были направлены на миниатюризацию биохимических и иммунобиологических анализов, обычно выполняемых в 96-луночных микротитровальных планшетах. Хотя массивы антител на основе 96-луночных планшетов обладают высокой пропускной способностью, небольшая площадь поверхности в каждой лунке ограничивает количество пятен антител и, следовательно, количество обнаруживаемых аналитов. Другие твердые подложки, такие как предметные стекла и нитроцеллюлозные мембраны, впоследствии были использованы для разработки массивов, которые могли бы вместить более крупные панели антител. [13] Матрицы на основе нитроцеллюлозных мембран являются гибкими, простыми в обращении и обладают повышенной способностью связывания с белками, но менее поддаются высокопроизводительной или автоматизированной обработке. Химически модифицированные стеклянные слайды позволяют печатать пятна антител субмикролитрового размера, уменьшая площадь поверхности матрицы без ущерба для плотности пятен. Это, в свою очередь, снижает объем потребляемой пробы. Массивы на основе стеклянных слайдов, благодаря их гладкой и жесткой структуре, также могут быть легко установлены в высокопроизводительные системы обработки жидкостей.
В большинстве систем с матрицами антител используется один из двух неконкурентных методов иммунодетекции: обнаружение одного антитела (на основе метки) и обнаружение двух антител (на основе сэндвича). Последний метод, в котором для обнаружения аналита требуется связывание двух различных антител (захватывающее антитело и репортерное антитело, каждое из которых связывается с уникальным эпитопом), обеспечивает большую специфичность и более низкий фоновый сигнал по сравнению с иммунодетекцией на основе метки (где только одно захватывающее антитело). антитела и обнаружение достигается путем химической маркировки всех белков в исходном образце). Матрицы антител на основе сэндвичей обычно достигают наивысшей специфичности и чувствительности (уровни ng - pg) из любого формата массива; их воспроизводимость также позволяет проводить количественный анализ. [14] [15] Из-за сложности разработки согласованных пар антител, совместимых со всеми другими антителами в панели, для небольших массивов часто используется сэндвич-подход. И наоборот, массивы с высокой плотностью легче разработать при меньших затратах, используя подход, основанный на метке одного антитела. В этой методологии используется один набор специфических антител, и все белки в образце метятся непосредственно флуоресцентными красителями или гаптенами.
Первоначальное использование систем массивов на основе антител включало обнаружение IgG и специфических подклассов, [16] [17] анализ антигенов, [18] скрининг рекомбинантных антител , [19] [20] изучение протеинкиназ дрожжей, [21] анализ аутоиммунных антител, [ 22] и изучение белок-белковых взаимодействий. [23] [24] [25] Первый подход к одновременному обнаружению нескольких цитокинов в физиологических образцах с использованием технологии массива антител был предложен Руо-Пан Хуанг и его коллегами в 2001 году. [26] В их подходе использовались мембраны Hybond ECL для обнаружения небольшой панели 24 цитокина из среды клеточной культуры, кондиционированной среды и сыворотки пациента, и были способны профилировать экспрессию цитокинов на физиологическом уровне. Хуанг взял эту технологию и основал новый бизнес, RayBiotech, Inc., который первым успешно коммерциализировал планарный массив антител.
За последние десять лет чувствительность метода была улучшена за счет оптимизации химического состава поверхности, а также специальных протоколов для их химической маркировки. [27] В настоящее время чувствительность массивов антител сравнима с чувствительностью ELISA [28] [29], и наборы антител регулярно используются для профилирования экспериментов с образцами тканей, образцами плазмы или сыворотки и многими другими типами образцов. Одним из основных направлений исследований профилирования на основе массивов антител является открытие биомаркеров, особенно рака. [30] [31] [32] [33] [34] Для исследований, связанных с раком, в 2010 году было сообщено о разработке и применении массива антител, включающего 810 различных антител, связанных с раком. [35] Также в 2010 году было обнаружено антитело. массив, содержащий 507 цитокинов, хемокинов, адипокинов, факторы роста, ангиогенные факторы, протеазы, растворимые рецепторы, растворимые молекулы адгезии и другие белки, был использован для скрининга сыворотки пациентов с раком яичников и здоровых людей и обнаружил значительную разницу в экспрессии белка между нормальными и образцы рака. [36] Совсем недавно наборы антител помогли определить специфические сывороточные белки, связанные с аллергией, уровни которых связаны с глиомой и могут снизить риск за годы до постановки диагноза. [37] Профилирование белков с помощью массивов антител также оказалось успешным не только в исследованиях рака, но и в неврологических заболеваниях, таких как болезнь Альцгеймера. В ряде исследований предпринимались попытки идентифицировать панели биомаркеров, которые могут отличить пациентов с болезнью Альцгеймера, и во многих в этом процессе использовались массивы антител. Джегер и его коллеги измерили около 600 циркулирующих белков, чтобы обнаружить биологические пути и сети, пораженные болезнью Альцгеймера, и исследовали положительные и отрицательные взаимосвязи уровней этих отдельных белков и сетей с когнитивными характеристиками пациентов с болезнью Альцгеймера. [38] В настоящее время самый крупный коммерчески доступный комплекс антител на основе сэндвичей обнаруживает 1000 различных белков. [39] Кроме того, доступны сервисы профилирования белков на основе микрочипов антител, позволяющие анализировать содержание белка и статус фосфорилирования или убиквитинилирования 1030 белков параллельно. [40]
Массивы антител часто используются для определения экспрессии белков в образцах многих типов, а также в образцах с различными препаратами. Цзян и его коллеги хорошо проиллюстрировали корреляцию между экспрессией белков матрицы в двух разных препаратах крови: сыворотке и сухих пятнах крови. [41] Эти различные препараты образцов крови были проанализированы с использованием трех платформ для массивов антител: на основе сэндвичей, количественных и основанных на метках, и была обнаружена сильная корреляция в экспрессии белка, предполагающая, что сухие пятна крови, которые являются более удобными и безопасными и недорогие средства получения крови, особенно в не госпитализированных областях общественного здравоохранения, можно эффективно использовать с анализом массива антител для обнаружения биомаркеров, профилирования белков, а также скрининга, диагностики и лечения заболеваний.
Приложения
Использование микрочипов антител в различных областях медицинской диагностики привлекло внимание исследователей. Цифровой биоанализ является примером таких областей исследования. В этой технологии массив микролунок на стеклянном / полимерном чипе засевается магнитными шариками (покрытыми флуоресцентными мечеными антителами), подвергается воздействию антигенов-мишеней и затем охарактеризован под микроскопом посредством подсчета флуоресцентных лунок. Недавно была продемонстрирована экономически эффективная платформа для изготовления (с использованием полимеров OSTE ) таких решеток микролунок, и была успешно охарактеризована модельная система биологических анализов. [42] Кроме того, иммуноанализ тиоленовых микропиллярных каркасов из «синтетической бумаги» показал, что они генерируют превосходный сигнал флуоресценции. [43]
Смотрите также
- ELISA
- Белковая микроматрица
- ДНК-микрочип
- Тканевый микрочип
- Химический состав микроматрицы
- Импринтинг микрочипов и формирование рисунка поверхностной энергии
Рекомендации
- ^ Ривас Л.А., Гарсиа-Villadangos М, Морено-Паз М, Круз-Жиль Р, Гомес-Эльвира Дж, Парро В (ноябрь 2008 г.). «Биочип с микрочипом на 200 антител для мониторинга окружающей среды: поиск универсальных микробных биомаркеров посредством иммунопрофилирования» . Анальный. Chem . 80 (21): 7970–9. DOI : 10.1021 / ac8008093 . PMID 18837515 .
- ^ Чага Г.С. (2008). «Массивы антител для определения относительного содержания белка». Тканевая протеомика . Методы молекулярной биологии. 441 . С. 129–51. DOI : 10.1007 / 978-1-60327-047-2_9 . ISBN 978-1-58829-679-5. PMID 18370316 .
- ^ Уилсон JJ; Burgess R .; Мао YQ; Luo S .; Тан Х .; Джонс VS; и другие. (2015). Глава седьмая - Массивы антител в открытии биомаркеров . Успехи клинической химии . 69 . С. 255–324. DOI : 10.1016 / bs.acc.2015.01.002 . ISBN 9780128022658. PMID 25934364 .
- ^ Линь Ю., Хуанг Р.С., Цао Х., Ван С.-М., Ши К., Хуанг Р.-П. (2003). «Обнаружение множественных цитокинов с помощью белковых массивов из клеточного лизата и тканевого лизата». Clin Chem Lab Med . 41 (2): 139–145. DOI : 10.1515 / cclm.2003.023 . PMID 12666998 .CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
- ^ Чанг Т.В. (декабрь 1983 г.). «Связывание клеток с матриксами различных антител, нанесенных на твердую поверхность». J. Immunol. Методы . 65 (1-2): 217-23. DOI : 10.1016 / 0022-1759 (83) 90318-6 . PMID 6606681 .
- ^ Chang, Tse W. Патент США 4591570 «Матрица покрытых антителами пятен для определения антигенов», дата приоритета 2 февраля 1983 г.
- ^ Chang, Tse W. Патент США 4829010 «Устройство для иммуноанализа, включающее матрицы пятен антител для определения клеток», дата приоритета 13 марта 1987 г.
- ^ Chang, Tse W. Патент США 5,100,777 «Устройство для определения матрицы антител и метод оценки иммунного статуса», дата приоритета 27 апреля 1987 г.
- ^ Чанг Т.В. (март 1993 г.). «Иммуносорбентная цитометрия». Биотехнология . 11 (3): 291–3. DOI : 10.1038 / nbt0393-291 . PMID 7765290 .
- ^ Экинс Р.П. (1989). «Мультианализный иммуноанализ». J Pharm Biomed Anal . 7 (2): 155–68. DOI : 10.1016 / 0731-7085 (89) 80079-2 . PMID 2488616 .
- ^ Экинс Р.П., Чу Ф.В. (ноябрь 1991 г.). «Мультианалитический иммуноанализ микропятен - микроаналитический« компакт-диск »будущего». Clin. Chem . 37 (11): 1955–67. DOI : 10.1016 / 0167-7799 (94) 90111-2 . PMID 1934470 .
- ^ Экинс Р.П. (сентябрь 1998 г.). «Анализ лигандов: от электрофореза до миниатюрных микрочипов» . Clin. Chem . 44 (9): 2015–30. DOI : 10.1093 / clinchem / 44.9.2015 . PMID 9733000 .
- ^ Цзян, В., Мао, YQ, Хуанг, Р., Дуань, К., Си, Ю., Ян, К., и Хуанг, Р.П. (2014). «Профилирование экспрессии белка с помощью анализа массива антител с использованием образцов сухих пятен крови на фильтровальной бумаге». Журнал иммунологических методов . 403 (1): 79–86. DOI : 10.1016 / j.jim.2013.11.016 . PMID 24287424 .CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
- ^ Цзэн К., Чен В. (2010). «Функциональное поведение модели совместного культивирования макрофагов / фибробластов, полученной от нормальных мышей и мышей с диабетом, с морским желатином-окисленным альгинатным гидрогелем» . Биоматериалы . 31 (22): 5772–5781. DOI : 10.1016 / j.biomaterials.2010.04.022 . PMC 2876200 . PMID 20452666 .
- ^ Sohn Elliott H; и другие. (2015). «Трансплантаты аллогенных ИПСК клеток RPE вызывают иммунный ответ у свиней: пилотное исследование» . Научные отчеты . 5 : 11791. Bibcode : 2015NatSR ... 511791S . DOI : 10.1038 / srep11791 . PMC 4490339 . PMID 26138532 .
- ^ Зильзель Дж. У., Черчек Б., Додсон К., Цай Т., Обремски Р. Дж. (1998). «Масс-зондирование, иммуноаналитический анализ на микрочипах с визуализацией» . Clin. Chem . 44 (9): 2036–2043. DOI : 10.1093 / clinchem / 44.9.2036 . PMID 9733002 .CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
- ^ Мендоза Л.Г., Маккуари П., Монган А., Гангадхаран Р., Бриньяк С., Эггерс М. (1999). «Высокопроизводительный иммуноферментный анализ на основе микрочипов (ELISA)» . Биотехнологии . 27 (4): 778–788. DOI : 10.2144 / 99274rr01 . PMID 10524321 .CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
- ^ Люкинг А., Хорн М., Эйкхофф Х., Буссоу К., Лехрах Х., Вальтер Г. (1999). «Белковые микрочипы для экспрессии генов и скрининга антител». Анальный. Biochem . 270 (1): 103–111. DOI : 10.1006 / abio.1999.4063 . PMID 10328771 .CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
- ^ de Wildt, RM, Mundy, CR, Gorick, BD, and Tomlinson, IM (2000) Массивы антител для высокопроизводительного скрининга взаимодействий антитело-антиген. Nature Biotechnol. 18, 989–994
- ^ Холт Л.Дж., Буссоу К., Уолтер Г., Томлинсон И.М. (2000). «Обходной отбор: прямой скрининг на взаимодействие антитело-антиген с использованием белковых массивов» . Nucleic Acids Res . 28 (15): E72. DOI : 10.1093 / NAR / 28.15.e72 . PMC 102691 . PMID 10908365 .CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
- ^ Чжу Х., Клемич Дж. Ф., Чанг С., Бертоне П., Казамайор А., Клемич К. Г., Смит Д., Герштейн М., Рид М. А., Снайдер М. (2000). «Анализ протеинкиназ дрожжей с использованием протеиновых чипов». Генетика природы . 26 (3): 283–289. DOI : 10.1038 / 81576 . PMID 11062466 .CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
- ^ Джоос Т.О., Шренк М., Хопфл П., Крогер К., Чоудхури У., Столл Д., Шорнер Д., Дурр М., Херик К., Рупп С., Сон К., Хаммерл Х. (2000). «Иммуноферментный иммуноферментный микроматричный анализ для аутоиммунной диагностики». Электрофорез . 21 (13): 2641–2650. DOI : 10.1002 / 1522-2683 (20000701) 21:13 <+2641 :: помощь-elps2641> 3.0.co; 2-5 . PMID 10949141 .CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
- ^ Уолтер Г., Буссоу К., Кэхилл Д., Люкинг А., Лехрах Х. (2000). «Белковые массивы для экспрессии генов и скрининга молекулярных взаимодействий». Curr. Opin. Microbiol . 3 (3): 298–302. DOI : 10.1016 / s1369-5274 (00) 00093-X . PMID 10851162 .CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
- ^ Служба РФ (2000). «Биохимия: белковые массивы выходят из тени ДНК». Наука . 289 (5485): 1673. DOI : 10.1126 / science.289.5485.1673 . PMID 11001728 .
- ^ Ван Ю., Ву Т.Р., Цай С., Велте Т., Чин Ю.Е. (2000). «Stat1 как компонент альфа-рецептора фактора некроза опухоли 1-TRADD сигнального комплекса для ингибирования активации NF-κB» . Молекулярная и клеточная биология . 20 (13): 4505–4512. DOI : 10.1128 / mcb.20.13.4505-4512.2000 . PMC 85828 . PMID 10848577 .CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
- ^ Р.-П. Хуанг. (2001). Одновременное обнаружение нескольких белков с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) и усиленной хемилюминесценции (ECL). Clin. Chem. Лаборатория. Med. 39: 209-214.
- ^ Кушнезов В., Банзон В., Шредер К., Шаал Р., Хохейзель Д. Д., Рюффер С., Люфт П., Душль А., Сягайло Ю. В. (2007). «Профилирование сложных образцов на основе микрочипов антител: систематическая оценка стратегий маркировки». Протеомика . 7 (11): 1786–99. DOI : 10.1002 / pmic.200600762 . PMID 17474144 .
- ^ Кушнезов В., Банзон В., Шредер К., Шаал Р., Хохейзель Д. Д., Рюффер С., Люфт П., Душль А., Сягайло Ю. В. (2007). «Профилирование сложных образцов на основе микрочипов антител: систематическая оценка стратегий маркировки». Протеомика . 7 (11): 1786–99. DOI : 10.1002 / pmic.200600762 . PMID 17474144 .
- ^ Wingren Christer, Ingvarsson Johan, Dexlin Linda, Szul Dominika, Borrebaeck Carl AK (2007). «Дизайн микрочипов рекомбинантных антител для комплексного протеомного анализа: выбор метки-метки образца и твердой подложки». Протеомика . 7 (17): 3055–3065. DOI : 10.1002 / pmic.200700025 . PMID 17787036 .CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
- ^ Альхамдани, MS; Schröder, C; Hoheisel, JD (6 июля, 2009 г.). «Онкопротеомное профилирование с помощью микрочипов антител». Геномная медицина 1 (7): 68
- ^ Джонс В.С., Хуанг Р.Й., Чен Л.П., Чен З.С., Фу Л., Хуанг Р.П. (2016). «Цитокины в лекарственной устойчивости рака: подсказки к новым терапевтическим стратегиям» . Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Обзоры рака . 1865 (2): 255–265. DOI : 10.1016 / j.bbcan.2016.03.005 . PMID 26993403 .CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
- ^ Буркхолдер Б., Берджесс Р.Й.Р., Луо С.Х., Джонс В.С., Чжан В.Дж., Lv ZQ, Гао С.-Й., Ван Б.-Л., Чжан Ю.-М., Хуанг Р.-П. (2014). «Опухолевые нарушения цитокинов и сетей иммунных клеток» . Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Обзоры рака . 1845 (2): 182–201. DOI : 10.1016 / j.bbcan.2014.01.004 . PMID 24440852 .CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
- ^ Lin Y .; Luo S .; Shao N .; Wang S .; Duan C .; Burkholder B .; и другие. (2013). «Заглянув в черный ящик: как массивы цитокиновых антител проливают свет на молекулярные механизмы развития рака груди и его лечение». Современная протеомика . 10 (4): 269–277. DOI : 10.2174 / 1570164610666131210233343 .
- ^ Хуанг Р.-П. (2007). «Множество возможностей в исследовании рака с использованием массивов цитокиновых антител». Экспертный обзор протеомики . 4 (2): 299–308. DOI : 10.1586 / 14789450.4.2.299 . PMID 17425464 .
- ^ Шредер С., Якоб А., Тонак С., Радон Т.П., Силл М., Цукник М., Рюффер С., Костелло Е., Неоптолемос Дж. П., Црногоц-Юрчевич Т., Бауэр А., Фелленберг К., Хохейзель Дж. Д. (2010). «Двухцветное протеомное профилирование сложных образцов с микрочипом из 810 антител, связанных с раком» . Молекулярная и клеточная протеомика . 9 (6): 1271–80. DOI : 10.1074 / mcp.m900419-MCP200 . PMC 2877986 . PMID 20164060 .
- ^ Хуанг Р., Цзян В., Ян Дж., Мао Ю.К., Чжан Ю., Ян В., Ян Д., Буркхолдер Б., Хуанг Р.Ф., Хуанг Р.П. (2010). «Массив антител на основе биотиновой метки для профилирования экспрессии белка с высоким содержанием». Геномика рака. Протеомика . 7 (3): 129–41. PMID 20551245 .CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
- ^ Schwartzbaum J .; Seweryn M .; Holloman C .; Harris R .; Хендельман СК; Ремпала GA; и другие. (2015). «Связь между преддиагностическими аллергическими цитокинами сыворотки и глиомой» . PLOS ONE . 10 (9): e0137503. Bibcode : 2015PLoSO..1037503S . DOI : 10.1371 / journal.pone.0137503 . PMC 4564184 . PMID 26352148 .
- ^ Jaeger PA; Лучин К.М.; Britschgi M .; Вардараджан Б .; Хуанг Р.-П .; Кирби ЭД; и другие. (2016). «Управляемая сетью протеомика плазмы выявляет молекулярные изменения в мозге Альцгеймера» . Молекулярная нейродегенерация . 11 (1): 31. DOI : 10,1186 / s13024-016-0105-4 . PMC 4877764 . PMID 27216421 .
- ^ RayBiotech, Inc. Массивы антител. (2017). Получено с веб-сайта RayBiotech, Inc. http://www.raybiotech.com/antibody-array.html
- ^ «Sciomics: антитело встречает микроматрицу - scioPhospho» . www.sciomics.de . Проверено 24 апреля 2018 .
- ^ Цзян, В., Мао, YQ, Хуанг, Р., Дуань, К., Си, Ю., Ян, К., и Хуанг, Р.П. (2014). «Профилирование экспрессии белка с помощью анализа массива антител с использованием образцов сухих пятен крови на фильтровальной бумаге». Журнал иммунологических методов . 403 (1): 79–86. DOI : 10.1016 / j.jim.2013.11.016 . PMID 24287424 .CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
- ^ Декроп Дебора (2017). «Одностадийный импринтинг массивов микролунок фемтолитера позволяет проводить цифровые биоанализы с аттомолярным пределом обнаружения». Прикладные материалы и интерфейсы ACS . 9 (12): 10418–10426. DOI : 10.1021 / acsami.6b15415 . PMID 28266828 .
- ^ Guo, W; Вилаплана, L; Hansson, J; Marco, P; ван дер Вейнгаарт, Вт (2020). «Иммуноанализы на тиоленовой синтетической бумаге генерируют превосходный сигнал флуоресценции». Биосенсоры и биоэлектроника . 163 : 112279. дои : 10.1016 / j.bios.2020.112279 . PMID 32421629 .