Связанное с ферментом иммунное поглощающее пятно ( ELISpot ) представляет собой тип анализа , который фокусируется на количественном измерении частоты секреции цитокинов для отдельной клетки. Анализ ELISpot также является формой иммунного окрашивания, поскольку он классифицируется как метод, в котором используются антитела для обнаружения анализируемого белка, причем слово аналит относится к любому биологическому или химическому веществу, которое идентифицируется или измеряется.
Анализ FluoroSpot представляет собой разновидность анализа ELISpot. Анализ FluoroSpot использует флуоресценцию для анализа нескольких аналитов, что означает, что он может обнаруживать секрецию более чем одного типа белка.
Сесил Черкински впервые описал ELISpot в 1983 году как новый способ количественной оценки продукции антиген-специфического иммуноглобулина клетками гибридомы . В 1988 году Черкински разработал точечный анализ ELISA , который количественно определял секрецию лимфокина Т - клетками . В том же году двухцветный ELISpot впервые был объединен с компьютерной визуализацией, что позволило проводить подсчет и анализ пятен. 1988 г. также ознаменовался первым использованием планшетов с мембранным дном для проведения этих анализов. [1]
Анализ FluoroSpot очень похож на анализ ELISpot. Основное отличие заключается в том, что анализ FluoroSpot позволяет анализировать присутствие нескольких аналитов на одном планшете с лунками, тогда как анализ ELISpot может анализировать только один аналит за раз. Анализ FluoroSpot выполняет это, используя флуоресценцию, а не ферментативную реакцию для обнаружения. Шаги анализа FluoroSpot также аналогичны с некоторыми отличиями. [8]
Поскольку анализ FluoroSpot идентифицирует и количественно определяет присутствие нескольких аналитов, возможно, что поглощение одного аналита может повлиять на секрецию другого аналита; это называется эффектами захвата. [8] Влияние аналита на другой аналит может быть положительным или отрицательным (выработка второго аналита может как увеличиваться, так и уменьшаться). Чтобы противодействовать эффектам захвата, можно использовать костимуляцию, чтобы обойти снижение производства аналита. [8] Это когда в лунки добавляют второе антитело, стимулирующее выработку того же аналита.
Анализы ELISpot и FluoroSpot можно использовать во многих областях исследований: разработка вакцин, [10] рак, [11] аллергии, [12] характеристика моноцитов/макрофагов/дендритных клеток, анализ аполипопротеинов и ветеринарные исследования. С помощью ELISpot вы можете изучать ответы антиген-специфических цитокинов, клетки, секретирующие антитела, [13] опухолевые антигены, [11] высвобождение гранзима В и перфорина Т-клетками, эффективность вакцины, [14] картирование эпитопов, [15] цитотоксические Т -клетки. -клеточная активность, обнаружение IL-4, IL-5 и IL-13, [12] индуцированные вакциной ответы антител, антиген-специфические В-клетки памяти, [10] и многое другое.