Фенол-хлороформная экстракция - это метод жидкостно-жидкостной экстракции в молекулярной биологии, используемый для отделения нуклеиновых кислот от белков и липидов . [1]
Процесс [ править ]
Водные образцы, лизированные клетки или гомогенизированная ткань смешивают с равными объемами смеси фенол : хлороформ . Затем эту смесь центрифугируют. Поскольку смесь фенол : хлороформ не смешивается с водой, центрифуга вызывает образование двух различных фаз: верхней водной фазы и нижней органической фазы. Водная фаза поднимается вверх, поскольку она менее плотная, чем органическая фаза, содержащая фенол: хлороформ. Эта разница в плотности является причиной того, что фенол, который имеет лишь немного более высокую плотность, чем вода, должен быть смешан с хлороформом для образования смеси с гораздо большей плотностью, чем вода.
Гидрофобные липиды будут разделяться на нижнюю органическую фазу, а белки останутся на границе раздела между двумя фазами, в то время как нуклеиновые кислоты (а также другие загрязнители, такие как соли, сахара и т. Д.) Останутся в верхней водной фазе. Затем можно отобрать верхнюю водную фазу. Необходимо соблюдать осторожность, чтобы не допустить пипетирование любой органической фазы или материала на границе раздела . Эта процедура часто выполняется несколько раз, чтобы повысить чистоту ДНК. [2] Эта процедура дает большую двухцепочечную ДНК, которую можно использовать в ПЦР или ПДРФ .
Если смесь кислая, ДНК будет выпадать в осадок в органическую фазу, в то время как РНК остается в водной фазе. Это потому, что ДНК нейтрализуется легче, чем РНК.
У этого метода есть некоторые недостатки при использовании в судебной медицине. Это требует много времени и использует опасные реагенты. Кроме того, поскольку это двухэтапный процесс, связанный с переносом реагентов между пробирками, он подвержен большему риску загрязнения . [3]
См. Также [ править ]
- Кислотная экстракция тиоцианат-фенол-хлороформ гуанидиния
- Осаждение этанолом
- Очистка нуклеиновых кислот на спин-колонке
Ссылки [ править ]
- ^ Чан, ПК S .; Чан, ДП; К, КФ; Ю, МЫ; Cheung, JL; Ченг, AF (2001). «Оценка методов экстракции из тканей, залитых парафином для ПЦР-амплификации человеческой и вирусной ДНК» . Журнал клинической патологии . 54 (5): 401–403. DOI : 10.1136 / jcp.54.5.401 . PMC 1731425 . PMID 11328843 .
- ^ Sambrook, Иосиф; Рассел, Дэвид В. (2001). «Обычно используемые методы молекулярного клонирования» . Молекулярное клонирование . 3 .
- ^ Ли, Ричард (2015). Судебная биология . Бока-Ратон: CRC Press, Taylor & Francis Group. С. 115–117. ISBN 9781439889701.
 | Эта статья по молекулярной биологии - незавершенная . Вы можете помочь Википедии, расширив ее . |
