В биохимии и молекулярной биологии импульсный анализ - это метод исследования клеточного процесса, происходящего во времени, путем последовательного воздействия на клетки меченого соединения (импульс), а затем того же соединения в немеченой форме (погоня). [1]
Механизм
Выбранная клетка или группа клеток сначала подвергаются воздействию меченого соединения (импульс), которое должно быть включено в исследуемую молекулу или систему (см. Также маркировку импульсов ). Затем соединение проходит метаболические пути и используется в синтезе исследуемого продукта. Например, радиоактивно меченная форма лейцина ( 3 H-лейцин) может быть доставлена группе бета-клеток поджелудочной железы , которые затем используют эту аминокислоту для синтеза инсулина .
Вскоре после введения меченого соединения (обычно около 5 минут, но фактическое необходимое время зависит от исследуемого объекта) избыток того же, но немеченого вещества (чейз) вводится в окружающую среду. Следуя предыдущему примеру, производство инсулина будет продолжаться, но он больше не будет содержать радиоактивный лейцин, введенный в фазе импульса, и его нельзя будет увидеть при использовании методов обнаружения радиоактивных веществ. Однако движение меченого инсулина, продуцируемого в течение периода импульса, все еще можно было отслеживать внутри клетки. [2]
Использует
Этот метод полезен для определения активности определенных клеток в течение длительного периода времени. Метод был использован для изучения протеинкиназы С , убиквитина и многих других белков. Этот метод также использовался для доказательства существования и функции фрагментов Окадзаки . Джордж Пэлад использовал отслеживание пульса радиоактивных аминокислот, чтобы выяснить секреторный путь . [3] [4]
Рекомендации
- Перейти ↑ Takahashi M, Ono Y (2003). «Импульсный анализ протеинкиназы С». Методы Мол. Биол . 233 : 163–70. DOI : 10.1385 / 1-59259-397-6: 163 . ISBN 978-1-59259-397-2. PMID 12840506 .
- ^ Фергюсон П.Л., Кумбс Д.Х. (март 2000 г.). «Импульсный анализ сборки in vivo хвоста бактериофага Т4». J. Mol. Биол . 297 (1): 99–117. DOI : 10.1006 / jmbi.2000.3551 . PMID 10704310 .
- ^ Хойт М.А., Зич Дж., Такеучи Дж., Чжан М., Говертс С., Коффино П. (апрель 2006 г.). «Глицин-аланинские повторы нарушают правильное разворачивание субстрата протеасомой» . EMBO J . 25 (8): 1720–9. DOI : 10.1038 / sj.emboj.7601058 . PMC 1440830 . PMID 16601692 .
Рисунки и таблицы - показывающий анализ Pulse-Chase
- ^ Альбертс, Б. (март 2002 г.). Молекулярная биология клетки, четвертое издание . ISBN 978-0-8153-3218-3.