Радиоиммуноанализ ( РИА ) – это иммуноанализ , в котором меченые радиоактивным изотопом молекулы используются для поэтапного образования иммунных комплексов . РИА — это очень чувствительный метод анализа in vitro , используемый для измерения концентраций веществ, обычно измеряющий концентрации антигенов (например, уровни гормонов в крови ) с помощью антител .
Хотя метод РИА чрезвычайно чувствителен и чрезвычайно специфичен и требует специального оборудования, он остается одним из наименее дорогостоящих методов проведения таких измерений. Это требует особых мер предосторожности и лицензирования, поскольку используются радиоактивные вещества. [ нужна ссылка ]
Напротив, иммунорадиометрический анализ (IRMA) представляет собой иммуноанализ, в котором используются меченые радиоактивным изотопом молекулы, но немедленным, а не поэтапным способом.
Радиоаллергосорбентный тест (РАСТ) является примером радиоиммуноанализа. Он используется для выявления причинного аллергена аллергии .
Традиционно для проведения радиоиммуноанализа известное количество антигена делают радиоактивным , часто путем маркировки его гамма-радиоактивными изотопами йода , такими как 125-I , или трития [1] , присоединенного к тирозину . Затем этот меченный радиоактивным изотопом антиген смешивают с известным количеством антител к этому антигену, и в результате они специфически связываются друг с другом. Затем добавляется образец сыворотки пациента, содержащий неизвестное количество того же антигена. Это приводит к тому, что немеченый (или «холодный») антиген из сыворотки конкурирует с радиоактивно меченным антигеном («горячим») за сайты связывания антител. Какконцентрация «холодного» антигена увеличивается, большая часть его связывается с антителом, вытесняя радиоактивно меченный вариант и уменьшая соотношение связанного с антителом радиоактивно меченного антигена к свободному радиоактивно меченному антигену. Затем связанные антигены разделяют и радиоактивность свободного (несвязанного) антигена, оставшегося в супернатанте, измеряют с помощью гамма-счетчика . Затем это значение сравнивается со стандартизированной калибровочной кривой для определения концентрации немеченого антигена в образце сыворотки пациента. [2] РИА могут обнаружить несколько пикограммов аналита в экспериментальных пробирках при использовании антител с высоким сродством. [1]
Этот метод в принципе можно использовать для любой биологической молекулы и не ограничивается сывороточными антигенами, а также не требуется использовать непрямой метод измерения свободного антигена вместо прямого измерения захваченного антигена. Например, если нежелательно или невозможно метить радиоактивным изотопом интересующий антиген или молекулу-мишень, можно провести РИА, если доступны два разных антитела, распознающих мишень, и мишень достаточно велика (например, белок), чтобы представить несколько эпитопык антителам. Одно антитело будет помечено радиоактивным изотопом, как указано выше, тогда как другое останется немодифицированным. РИА начнется с того, что «холодному» немеченому антителу будет позволено взаимодействовать и связываться с целевой молекулой в растворе. Предпочтительно, это немеченое антитело каким-либо образом иммобилизуется, например, связывается с агарозными шариками, наносится на поверхность и т.д. Затем «горячему» радиоактивно меченому антителу дают возможность взаимодействовать с первым комплексом антитело-молекула-мишень. После интенсивной промывки непосредственно измеряют количество связанных радиоактивных антител и количественно определяют количество целевой молекулы, сравнивая его с эталонным количеством, анализируемым в то же время. Этот метод по принципу аналогичен нерадиоактивному сэндвич- методу ИФА . [3]