Из Википедии, бесплатной энциклопедии
  (Перенаправлено с серебряных пятен )
Перейти к навигации Перейти к поиску

В патологии , окрашивание серебра , является использование серебра , чтобы выборочно изменять внешний вид мишени в микроскопии на гистологические срезы ; в градиентном гель-электрофорезе ; и в полиакриламидных гелях .

В традиционном витражей , серебро пятно представляет собой метод для получения желтого до оранжевого или коричневых оттенков (или зеленого на голубой стеклянной основе), путем добавления смеси , содержащей соединения серебра ( в частности , нитрат серебра ), и обжиг слегка. Он был введен вскоре после 1800 года и является «пятном» в термине «витраж». Соединения серебра [1] смешиваются со связующими веществами, наносятся на поверхность стекла, а затем обжигаются в печи или печи. [2] [3]

История [ править ]

Камилло Гольджи усовершенствовал окрашивание серебром для исследования нервной системы . Хотя точный химический механизм, с помощью которого это происходит, неизвестен, [4] метод Гольджи окрашивает ограниченное количество клеток случайным образом полностью. [5]

Окрашивание серебром было введено Кереньи и Галлясом в качестве чувствительной процедуры для обнаружения следовых количеств белков в гелях . [6] Метод был распространен на изучение других биологических макромолекул , которые были разделены на различных носителях. [7]

Классическое окрашивание кумасси бриллиантовым синим обычно позволяет обнаружить полосу белка 50 нг; окрашивание серебром увеличивает чувствительность обычно в 50 раз.

Многие переменные могут влиять на интенсивность окраски, и каждый белок имеет свои собственные характеристики окрашивания; чистая посуда, чистые реактивы и вода высшей степени чистоты - вот ключевые факторы успешного окрашивания. [8]

Химия [ править ]

Некоторые клетки аргентафиновые . Они восстанавливают раствор серебра до металлического серебра после фиксации формалином . Остальные клетки аргирофильные . Они восстанавливают раствор серебра до металлического серебра после контакта с пятном, содержащим восстановитель , например гидрохинон или формалин.

Нитрат серебра образует нерастворимый фосфат серебра с ионами фосфата ; этот метод известен как пятно фон Косса . Под воздействием восстановителя, обычно гидрохинона , образуется элементарное серебро черного цвета. Это используется для изучения образования частиц фосфата кальция во время роста костей.

Приложения [ править ]

Гистологическая характеристика [ править ]

Окрашивание серебром помогает визуализировать интересующие мишени, а именно внутриклеточные и внеклеточные клеточные компоненты, такие как ДНК и белки , такие как коллаген III типа и волокна ретикулина, путем осаждения частиц металлического серебра на интересующих мишенях. [9]

Диагностическая микробиология [ править ]

Pseudomonas , [10] Legionella , Leptospira , H. pylori , Bartonella и Treponema , а также грибы, такие как Pneumocystis , Cryptococcus и Candida, являются микроорганизмами, окрашенными серебром. [ необходима цитата ]

Анализ кариотипа [ править ]

Окрашивание серебром используется при кариотипировании . Нитрат серебра окрашивает белок, ассоциированный с областью ядрышковой организации (ЯОР), образуя темную область, в которой осаждается серебро, и обозначает активность генов рРНК в ЯОР. Человеческие хромосомы 13, 14, 15, 21 и 22 имеют ЯОР, которые увеличивают активность окрашивания серебром как минимум в 50 раз. [ необходима цитата ]

Геномный и протеомный анализ [ править ]

Окрашивание серебром используется для окрашивания гелей. Окрашивание белков серебром в гелях агарозы было разработано в 1973 году Кереньи и Галлясом. [11] Позже он был адаптирован для полиакриламидных гелей, используемых в SDS-PAGE , [12] [13] [14] [15] [16], а также для окрашивания ДНК или РНК. [17] В гликозилировании из гликопротеинов и полисахаридов может быть окислено с помощью 1-часовой предварительной обработки с 0,1% периодной кислотой при температуре 4 ° С, что улучшает связывание ионов серебра и в результате окрашивания. [18]

Сначала белки денатурируют в геле фиксирующим раствором 10% уксусной кислоты и 30% этанола и осаждают, в то же время экстрагируют детергент (в основном SDS ). Таким образом, диффузия белков значительно снижается. После многократного промывания водой гель инкубируют в растворе нитрата серебра . Ионы серебра связываются с отрицательно заряженными боковыми цепями белков. Затем избыток ионов серебра смывается водой. На заключительном этапе проявления ионы серебра восстанавливаются до элементарного серебра добавлением щелочного формальдегида . Это окрашивает участки, где присутствуют белки, от коричневого до черного.

Интенсивность окрашивания зависит от первичной структуры белка. Кроме того, на серебряное пятно влияет чистота используемых сосудов и чистота реагентов . [19] Обычными артефактами в гелях, окрашенных серебром, являются полосы кератина в диапазоне от 54-57 кДа и 65-68 кДа [20] как загрязнение образца до электрофореза.

Пятна серебра метенамином [ править ]

Есть несколько пятен серебра, содержащих метенамин , в том числе:

  • Окрашивание серебра метенамином Грокотта , широко используемое в качестве экрана для грибковых организмов .
  • Окрашивание Джонса , метенамин серебро-Периодная кислота-Шифф, которое окрашивает базальную мембрану , помогая увидеть «шипованный» GBM, связанный с мембранозным гломерулонефритом .

Галерея [ править ]

  • Серебряное пятно ( GMS ), демонстрирующее грибок Histoplasma (черные круглые шары) при биопсии печени.

  • Ряд образцов ДНК из образцов Littorina plena амплифицировали с помощью ПЦР с праймерами, нацеленными на локус вариабельного простого повтора последовательности (SSR, также известный как микросателлитный). Образцы были обработаны на 5% -ном полиакриламидном геле и визуализированы с помощью окрашивания серебром.

  • Белки мембраны эритроцитов разделяют с помощью SDS-PAGE и окрашивают серебром. [21]

Ссылки [ править ]

  1. ^ Steinhoff, Фредерик Луи (1973). Керамическая промышленность . Industrial Publications, Incorporated.
  2. ^ Энциклопедия Чемберса игровых . Pergamon Press. 1967 г.
  3. ^ «Факты о стекле: серебряное пятно» , проект по сохранению Боппарда - Музеи Глазго; Практическая консервация зданий: стекло и остекление , издательство Historic England , 2011, Ashgate Publishing, Ltd., ISBN 0754645576 , 9780754645573, книги Google , стр. 290 
  4. Перейти ↑ Golgi C (1873). "Sulla struttura della sostanza grigia del cervello". Gazzetta Medica Italiana (Ломбардия) . 33 : 244–246.
  5. ↑ Grant G (октябрь 2007 г.). «Как Нобелевская премия по физиологии и медицине 1906 года была разделена между Гольджи и Кахалем». Brain Res Rev . 55 (2): 490–498. DOI : 10.1016 / j.brainresrev.2006.11.004 . PMID 17306375 . 
  6. ^ Кереньи L, Gallyas F (1973). "Über Probleme der Quantitiven Auswertung der mit Physikalischer Entwicklung versilberten Agarelektrophoretogramme". Clin. Чим. Acta . 47 (3): 425–436. DOI : 10.1016 / 0009-8981 (73) 90276-3 . PMID 4744834 . 
  7. ^ Switzer RC третьих, Меррил CR, Шифрин S (сентябрь 1979). «Высокочувствительный серебряный краситель для обнаружения белков и пептидов в полиакриламидных гелях». Анальный. Биохим . 98 (1): 231–237. DOI : 10.1016 / 0003-2697 (79) 90732-2 . PMID 94518 . CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  8. ^ Hempelmann Е, Шульц М, Гетце О (1984). «Свободные SH-группы важны для полихроматического окрашивания белков нитратом серебра». Neuhof V (Ed) Electrophoresis '84, Verlag Chemie Weinheim 1984 : 328–330.
  9. ^ Schwint О.А., Labraga МЫ, Червино СО, Haffar М, рН Sequeiros, Маркос HJ (2004). «Модификация метода окрашивания ретикулярных волокон для анализа изображений сердечной коллагеновой сети». Кардиоваск. Патол . 13 (4): 213–20. DOI : 10.1016 / S1054-8807 (03) 00153-4 . PMID 15210137 . 
  10. ^ Barnini S, Доди С, Кампа М (2004). «Повышенное разрешение случайного амплифицированного полиморфного ДНК-генотипирования синегнойной палочки» . Lett. Прил. Microbiol . 39 (3): 274–7. DOI : 10.1111 / j.1472-765X.2004.01576.x . PMID 15287874 . 
  11. ^ Kerényi L, Gallyas F (сентябрь 1973). «[Ошибки количественной оценки при электрофорезе в агаре с использованием окрашивания серебром]». Clin. Чим. Acta . 47 : 425–36. DOI : 10.1016 / 0009-8981 (73) 90276-3 . PMID 4744834 . 
  12. ^ Меррил CR, Switzer RC Ван Keuren ML (1979). «Следы полипептидов в клеточных экстрактах и ​​жидкостях человеческого тела, обнаруженные с помощью двумерного электрофореза и высокочувствительного окрашивания серебром» . Proc Natl Acad Sci USA . 76 (9): 4335–9. DOI : 10.1073 / pnas.76.9.4335 . PMC 411569 . PMID 92027 .  
  13. ^ RC Швей, CR Меррил, С. Шифрин (сентябрь 1979), "Высокочувствительный серебром для обнаружения белков и пептидов в полиакриламидном геле", Anal Biochem (на немецком языке ), 98 (1), стр. 231-237, DOI : 10.1016 / 0003-2697 (79) 90732-2 , PMID 94518 CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  14. ^ Rabilloud T и др. (1988). «Улучшение и упрощение низкофонового окрашивания белков серебром с помощью дитионита натрия». Электрофорез . 9 (6): 288–291. DOI : 10.1002 / elps.1150090608 . PMID 2466660 . 
  15. ^ Rabilloud Т (1992). «Сравнение низкофонового окрашивания диаммином серебра и белком нитрата серебра». Электрофорез . 13 (7): 429–439. DOI : 10.1002 / elps.1150130190 . PMID 1425556 . 
  16. ^ Лелон С, Chevallet МЫ, Luche S, Rabilloud Т (2009). Окрашивание белков серебром в гелях 2DE (PDF) . Методы Мол биол. 519 . С. 339–350. DOI : 10.1007 / 978-1-59745-281-6_21 . ISBN  978-1-58829-937-6. PMID  19381593 .
  17. Перейти ↑ Blum H, Beier H, Gross HJ (1987). «Улучшенное окрашивание серебром растительного белка, РНК и ДНК в гелях PAA». Электрофорез . 8 : 93–99. DOI : 10.1002 / elps.1150080203 .
  18. ^ Dubray G, Bezard G (1982). «Высокочувствительный периодический кислотно-серебряный краситель для 1,2-диольных групп гликопротеинов и полисахаридов в полиакриламидных гелях». Анальный. Биохим. 119 (2): 325–329. DOI : 10.1016 / 0003-2697 (82) 90593-0 . PMID 6176144 .  
  19. ^ Э. Хемпельманн, М. Шульце, О. Гетце: Свободные SH-группы важны для полихроматического окрашивания белков нитратом серебра. В: В. Нойгоф (Редактор): Электрофорез . Verlag Chemie, Weinheim, 1984, стр. 328–330.
  20. ^ Окс D (1983). «Белковые примеси гелей додецилсульфат-полиакриламид натрия». Анальная биохимия . 135 (2): 470–4. DOI : 10.1016 / 0003-2697 (83) 90714-5 . PMID 6197906 . 
  21. ^ Hempelmann Е, Гетце О (1984). «Характеристика мембранных белков с помощью полихроматического окрашивания серебром». Z Physiol Chem . Hoppe-Seyler . 365 : 241–242.

Внешние ссылки [ править ]

  • MedEd at Loyola Histo / практический / пятна / hp2-55.html
  • [1] Hempelmann E. SDS-Protein PAGE и определение белков с помощью окрашивания серебром и иммуноблоттинга белков Plasmodium falciparum. в: Moll K, Ljungström J, Perlmann H, Scherf A, Wahlgren M (eds) Methods in Malaria Research, 5th edition, 2008, 263-266.