Метод Гольджи является окрашиванием серебра метода , который используется для визуализации нервной ткани при световой микроскопии. Метод был открыт Камилло Гольджи , итальянским врачом и ученым , который опубликовал первое изображение, сделанное с помощью этого метода в 1873 году. [1] Первоначально он был назван Гольджи черной реакцией ( la reazione nera ), но позже стал известен как пятно Гольджи или более поздний метод Гольджи.
Окрашивание по Гольджи было использовано испанским нейроанатомом Сантьяго Рамоном-и-Кахалем (1852–1934) для открытия ряда новых фактов об организации нервной системы, которые вдохновили рождение нейронной доктрины . В конечном итоге Рамон-и-Кахаль усовершенствовал технику, применив метод, который он назвал «двойной пропиткой». Техника окрашивания Рамона-и-Кахала, которая используется до сих пор, называется «Пятно Кахала». [ необходима цитата ]
Механизм
Клетки нервной ткани плотно упакованы, и мало информации об их структурах и взаимосвязях можно получить, если все клетки окрашены. Более того, тонкие нитевидные отростки нервных клеток, включая аксон и дендриты нейронов, слишком тонкие и прозрачные, чтобы их можно было увидеть с помощью обычных методов окрашивания. Метод Гольджи окрашивает ограниченное количество клеток случайным образом полностью. Механизм, с помощью которого это происходит, по большей части неизвестен. [2] Дендриты, как и сома клеток, четко окрашены в коричневый и черный цвета, и их можно проследить по всей их длине, что позволило нейроанатомам отслеживать связи между нейронами и делать видимыми сложную сетевую структуру многих частей мозга. и спинной мозг .
Окрашивание по Гольджи достигается пропиткой фиксированной альдегидом нервной ткани бихроматом калия и нитратом серебра . Клетки , таким образом , окрашенные заполнены микрокристаллизациями из хромата серебра .
Техника
Согласно SynapseWeb, [3] это рецепт техники окрашивания Гольджи:
- Погрузите блок (примерно 10x5 мм) фиксированной формальдегидом (или перфузированной параформальдегидом - глутаральдегидом ) ткани мозга в 2% водный раствор дихромата калия на 2 дня.
- Вскоре просушите блок фильтровальной бумагой .
- Погрузите блок в 2% водный раствор нитрата серебра еще на 2 дня.
- Отрезать секции прибл. Толщина 20–100 мкм .
- Быстро обезвоживайте в этаноле , очистите и установите (например, в Депекс или Энталан).
С тех пор этот метод был усовершенствован для замены осадка серебра на золото путем погружения образца в хлорид золота, затем в щавелевую кислоту с последующим удалением серебра тиосульфатом натрия . Это сохраняет большую степень тонкой структуры с ультраструктурными деталями, отмеченными мелкими частицами золота. [4]
Цитировать
Рамон-и-Кахаль сказал о методе Гольджи:
- Я выразил удивление, которое испытал, увидев собственными глазами чудесную разоблачающую силу реакции хром-серебро и отсутствие какого-либо ажиотажа в научном мире, вызванного ее открытием.
- Recuerdos de mi vida, Vol. 2, Historia de mi labour científica . Мадрид: Моя, 1917, стр. 76.
Рекомендации
- ^ Finger, Стэнли (1994). Истоки нейробиологии: история исследований функций мозга . Издательство Оксфордского университета. п. 45. ISBN 9780195146943. OCLC 27151391 .
В 1873 году Гольджи опубликовал первое краткое, но «адекватное» изображение la reazione nera (реакция черного), на котором была показана вся нервная клетка, включая ее тело, аксон и ветвящиеся дендриты.
- ^ Николлс, Дж. Г. (2001). От нейрона к мозгу . Sinauer Associates. С. 5 . ISBN 0878934391.
- ^ Спейсек, Дж., Фиала, Дж. (2002-06-28). «Визуализация дендритных шипов» . SynapseWeb. Архивировано из оригинала на 2010-06-26 . Проверено 17 июня 2010 .CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
- ^ «Дом - Спрингер» .[ мертвая ссылка ]
Внешние ссылки
- Микрофотография клетки коры, окрашенной методом Гольджи . Галерея изображений IHC.
- Пропитки Гольджи . Изображения мозга мух.
- Визуализация дендритных шипов методом Гольджи . SynapseWeb. Включает покадровое исследование пропитки по Гольджи.
- Берреби, Альберт: Клеточная биология нейронов: структура и методы исследования . (в PDF)
- Изображения окрашенных срезов головного мозга, которые включают «окрашенные по Гольджи нейроны» в проекте BrainMaps.