Одноцветная рефлектометрия
Одноцветная рефлектометрия ( SCORE ), ранее известная как визуализирующая рефлектометрическая интерферометрия ( iRIf ) и 1-лямбда-рефлектометрия , представляет собой физический метод, основанный на интерференции монохроматического света на тонких пленках, который используется для исследования (био-)молекулярных взаимодействий. Полученные кривые связывания с использованием SCORE предоставляют подробную информацию о кинетике и термодинамике наблюдаемых взаимодействий, а также о концентрациях используемых аналитов. Эти данные могут быть актуальны для фармацевтического скрининга и разработки лекарств , биосенсоров и других биомедицинских приложений, диагностики и клеточных анализов.
Основной принцип соответствует принципу интерферометра Фабри-Перо , который также является основным принципом интерферометрии белого света .
Монохроматический свет освещается вертикально на задней стороне прозрачной многослойной подложки. Частичные пучки монохроматического света проходят и отражаются на каждой границе раздела многослойной системы. Наложение отраженных лучей приводит к деструктивной или конструктивной интерференции (в зависимости от длины волны используемого света и используемых материалов подложки/многослойной системы), которые можно обнаружить по изменению интенсивности отраженного света с помощью фотодиода , ПЗС или КМОП . элемент.
Чувствительный слой поверх многослойной системы может быть (био-)химически модифицирован рецепторными молекулами, например, антителами. Связывание специфических лигандов с иммобилизованными молекулами рецептора приводит к изменению показателя преломления n и физической толщины d чувствительного слоя. Произведение n и d дает оптическую толщину (n*d) чувствительного слоя.
Мониторинг изменения отраженной интенсивности используемого света с течением времени приводит к получению кривых связывания, которые предоставляют информацию о:
По сравнению с интерферометрией биослоя , которая отслеживает изменение интерференционной картины отраженного белого света, SCORE отслеживает только изменение интенсивности отраженного света с использованием фотодиода, ПЗС- или КМОП-элемента. Таким образом, можно анализировать не только одно взаимодействие, но и массивы с высокой плотностью до 10 000 взаимодействий на см 2 . [1] По сравнению с поверхностным плазмонным резонансом (SPR) , глубина проникновения которого ограничена затухающим полем , SCORE ограничен длиной когерентности .источника света, который обычно составляет несколько микрометров. Это особенно актуально при исследовании целых клеток. Кроме того, на SCORE (как и на BLI) не влияют колебания температуры во время измерения, тогда как SPR нуждается в термостабилизации.
