Кислотостойкость - это физическое свойство определенных бактериальных и эукариотических клеток, а также некоторых субклеточных структур, в частности их устойчивость к обесцвечиванию кислотами во время лабораторных процедур окрашивания . [1] [2] Окрашенные как часть образца, эти организмы могут противостоять процедурам обесцвечивания на основе кислоты и / или этанола, которые обычно используются во многих протоколах окрашивания, отсюда и название « кислотоустойчивые» . [2]
Механизмы кислотостойкости различаются в зависимости от вида, хотя наиболее известным примером является род Mycobacterium , который включает виды, ответственные за туберкулез и проказу. Кислотостойкость микобактерий обусловлена высоким содержанием миколиновой кислоты в их клеточных стенках , что отвечает за характер окрашивания: плохое всасывание с последующим высоким удерживанием. Некоторые бактерии также могут быть частично кислотоустойчивыми, например Nocardia .
Кислотоустойчивые организмы трудно охарактеризовать с помощью стандартных микробиологических методов, хотя их можно окрашивать с помощью концентрированных красителей, особенно когда процесс окрашивания сочетается с нагреванием. Некоторые, например микобактерии , могут быть окрашены красителем по Граму , но они плохо воспринимают кристаллический фиолетовый и поэтому выглядят светло-фиолетовыми, что потенциально может привести к неправильной грамположительной идентификации. [3]
Наиболее распространенным методом окрашивания, используемым для идентификации кислотоустойчивых бактерий, является окраска по Цилю-Нильсену , при которой кислотоустойчивые виды окрашиваются в ярко-красный цвет и четко выделяются на синем фоне. Другой метод - метод Киньюна , при котором бактерии окрашиваются в ярко-красный цвет и четко выделяются на зеленом фоне. Кислотостойкие микобактерии также можно визуализировать с помощью флуоресцентной микроскопии с использованием специфических флуоресцентных красителей (например, аурамин-родаминового красителя ). [4] Яйца паразитического легочного двуустки Paragonimus westermani фактически уничтожаются пятном, что может затруднить диагностику у пациентов с симптомами, подобными туберкулезу [ необходима цитата ] .
Некоторые методы кислотостойкого окрашивания
- Краситель Циля – Нильсена (классический и модифицированный типы отбеливателя) [5]
- Kinyoun пятно
- Для людей с дальтонизмом (или в фонах, где выявить красные бактерии сложно), Виктория синий может быть заменен на карбол фуксин, а пикриновая кислота может использоваться в качестве противодействующего красителя вместо метиленового синего , а также можно использовать остальную часть техники киньюна. [6]
- Различные методы окрашивания бактериальных спор с использованием Kenyon, например.
- Метод Меллера
- Метод Дорнера [7] (кислотно-спиртовой обесцвечивающий агент) без модификации Шеффера – Фултона [8] (обесцвечивание водой) [9]
- Моющий метод с использованием неионогенного полигликолевого эфира поверхностно-активных веществ Tergitol 7 типа НП-7 [10]
- Различные методы окрашивания бактериальных спор с использованием Kenyon, например.
- Пятно на фите [11]
- Окраска Эллиса и Заброварного [15] [16] (без фенола / карболовой кислоты)
- Окрашивание аурамином-родамином
- Окраска аурамин-фенолом
Известные кислотоустойчивые структуры
Очень немногие структуры кислотостойкие; это делает окрашивание на кислотостойкость особенно полезным в диагностике. Ниже приведены известные примеры кислотостойких или модифицированных кислотостойких структур:
- Все микобактерии - M. tuberculosis , M. leprae , M. smegmatis и атипичные микобактерии
- Актиномицеты (особенно некоторые аэробные) с миколовой кислотой в клеточной стенке (обратите внимание, у Streptomyces НЕТ); не путать с Actinomyces , родом некислотных актиномицетов.
- Nocardia (слабо кислотоустойчивый; сопротивляется обесцвечиванию при более низких концентрациях кислоты)
- Родококк
- Гордония (актиномицет)
- Цукамурелла
- Dietzia
- Голова спермы
- Бактериальные споры, см. Эндоспоры.
- Легионелла микдадеи
- Определенные клеточные включения, например
- Тельца включения цитоплазмы наблюдаются в
- Нейроны в слое 5 нейронального цероидного липофусциноза коры головного мозга ( болезнь Баттена ).
- Ядерные тела включения замечены в
- Отравление свинцом
- Отравление висмутом.
- Тельца включения цитоплазмы наблюдаются в
- Ооцисты некоторых кокцидий паразитов в фекалиях, такие как:
- Cryptosporidium parvum , [17]
- Isospora belli [18]
- Cyclospora cayetanensis . [19]
- Несколько других паразитов:
- Саркоцистис
- Яйца Taenia saginata хорошо окрашиваются, аяйца Taenia solium - нет (можно использовать для различения)
- Эхинококковые кисты , особенно их « крючки », окрашиваются нерегулярно ZN, но излучают ярко-красную флуоресценцию в зеленом свете и могут способствовать обнаружению на умеренно тяжелом фоне или с редкими крючками. [20]
- Формы грибковых дрожжей непостоянно окрашиваются кислотостойким красителем, который считается окрашиванием узкого спектра для грибов. [21] В исследовании кислотоустойчивости грибов [22] 60% бластомицетов и 47% гистоплазмы показали положительное цитоплазматическое окрашивание дрожжеподобных клеток, а криптококки или кандида не окрашивались, и наблюдались очень редкие окрашивания. в эндоспорах Coccidioides.
Рекомендации
- Перейти ↑ Madison B (2001). «Применение красителей в клинической микробиологии». Biotech Histochem . 76 (3): 119–25. DOI : 10.1080 / 714028138 . PMID 11475314 .
- ^ а б Райан К.Дж.; Рэй CG, ред. (2004). Шеррис Медицинская микробиология (4-е изд.). Макгроу Хилл. ISBN 0-8385-8529-9.
- ^ Рейнольдс, Джеки; Мойес, Рита Б .; Брейквелл, Дональд П. (ноябрь 2009 г.). «Дифференциальное окрашивание бактерий: кислотоустойчивое окрашивание». Текущие протоколы в микробиологии . Приложение 3: Приложение 3H. DOI : 10.1002 / 9780471729259.mca03hs15 . ISSN 1934-8533 . PMID 19885935 . S2CID 45685776 .
- ^ Эйб С (2003). «[Стандартизация лабораторных тестов на туберкулез и их квалификационная проверка]». Кеккаку . 78 (8): 541–51. PMID 14509226 .
- ^ «Кислотный быстрый / Аурамин-родамин» . www.pathologyoutlines.com .
- ^ Теория и практика гистологических методов, Джон Д. Бэнкрофт, 6-е изд, стр. 314
- ^ Dorner, W. 1926. Простая процедура для окрашивания спор. Le Lait 6: 8-12.
- ^ Шеффер А.Б., Фултон М. (1933). «Упрощенный метод окрашивания эндоспор». Наука . 77 (1990): 194. Bibcode : 1933Sci .... 77..194S . DOI : 10.1126 / science.77.1990.194 . PMID 17741261 .
- ^ Эндоспоровой Stain Протокол от Американского общества микробиологии сайта архивной 2012-06-01 в Wayback Machine
- ^ http://daignet.de/site-content/die-daig/fachorgan/2007-1/ejomr-2007_8-pdfs/S.356_Hayama.pdf
- ^ «Stainsfile - Fite» . Stainsfile.info . Архивировано из оригинала на 2011-11-18 . Проверено 28 июня 2012 .
- ^ «Протокол окрашивания по Фите-Фарако для лепрозных бацилл» . www.ihcworld.com .
- ^ "Stainsfile - Fite Faraco" . Stainsfile.info . Архивировано из оригинала на 2011-11-18 . Проверено 28 июня 2012 .
- ^ "Stainsfile - Уэйд Файт" . Stainsfile.info . Архивировано из оригинала на 2011-11-18 . Проверено 28 июня 2012 .
- ^ Эллис, RC; Заброварный, Л.А. (1993). «Более безопасный метод окрашивания кислотоустойчивых бацилл» . Журнал клинической патологии . 46 (6): 559–560. DOI : 10.1136 / jcp.46.6.559 . PMC 501296 . PMID 7687254 .
- ^ «Архивная копия» . Архивировано из оригинала на 2006-01-04 . Проверено 11 марта 2006 .CS1 maint: заархивированная копия как заголовок ( ссылка )
- ^ Гарсия Л.С., Брукнер Д.А., Брюэр Т.С., Шимицу Р.Ю. (июль 1983 г.). «Методы выделения и идентификации ооцист Cryptosporidium из образцов кала» . J. Clin. Microbiol . 18 (1): 185–90. DOI : 10.1128 / JCM.18.1.185-190.1983 . PMC 270765 . PMID 6193138 .
- ^ Нг Э., Маркелл Е.К., Флеминг Р.Л., Фрид М. (сентябрь 1984 г.). «Демонстрация Isospora belli кислотостойкой окраской у пациента с синдромом приобретенного иммунодефицита» . J. Clin. Microbiol . 20 (3): 384–6. DOI : 10.1128 / JCM.20.3.384-386.1984 . PMC 271334 . PMID 6208216 .
- ^ Ортега Ю. Р., Стерлинг С. Р., Гилман Р. Х., Кама В. А., Диас Ф. (май 1993 г.). «Вид Cyclospora - новый простейший возбудитель человека». N. Engl. J. Med . 328 (18): 1308–12. DOI : 10.1056 / NEJM199305063281804 . PMID 8469253 .
- ^ Клавель А., Вареа М., Дойс О, Лопес Л., Килес Дж., Кастильо Ф. Дж., Рубио С., Гомес-Лус Р. (1999). «Визуализация эхинококковых элементов: сравнение нескольких методик» . J Clin Microbiol . 37 (5): 1561–3. DOI : 10.1128 / JCM.37.5.1561-1563.1999 . PMC 84828 . PMID 10203521 .
- ^ "Продукты Дако - Аджилент" (PDF) . www.dako.com . Проверено 3 декабря 2018 .
- ^ Заработная плата ds, Wear dJ. кислотостойкость грибов при бластомикозах и гистоплазмозах. Arch Pathol Lab Med 1982; 106: 440-41.
Примеры онлайн-протокола
- Протокол Циля-Нильсена ( формат PDF ).
- Альтернативный метод Ellis & Zabrowarny для окрашивания AFB.