Окрашивание по Цилю – Нильсену - это разновидность кислотостойких красителей, впервые представленная Полем Эрлихом . Окрашивание по Цилю – Нильсену - это бактериологическая окраска, используемая для идентификации кислотоустойчивых организмов, в основном микобактерий . Он назван в честь двух немецких врачей, которые изменили окраску: бактериолога Франца Циля (1859–1926) и патолога Фридриха Нильсена (1854–1898).
Микобактерии
В образцах анатомической патологии иммуногистохимия и модификации окрашивания по Цилю – Нильсену (такие как метод Фите-Фарако ) имеют сопоставимую диагностическую ценность. Оба они превосходят традиционное окрашивание по Цилю – Нильсену. [1]
Род Mycobacterium - это медленнорастущие бактерии, состоящие из небольших палочек, слегка изогнутых или прямых, и считаются грамположительными. Некоторые виды микобактерий образуют ветви или нити. Некоторые микобактерии являются свободноживущими сапрофитами, но многие из них являются патогенами, вызывающими болезни у животных и людей. Mycobacterium bovis вызывает туберкулез у крупного рогатого скота. Поскольку туберкулез может передаваться людям, молоко пастеризуется, чтобы убить любые бактерии. [2] Некоторые виды Mycobacterium, вызывающие заболевание у людей, включают Mycobacterium leprae , Mycobacterium kansasii , Mycobacterium marinum , Mycobacterium bovis , Mycobacterium africanum и члены комплекса Mycobacterium avium . Mycobacterium tuberculosis - это разновидность микобактерий, вызывающих туберкулез (ТБ). Mycobacterium tuberculosis - это бактерия, передающаяся по воздуху, которая обычно поражает легкие человека. [3] [4] Симптомы туберкулеза включают сильный кашель, боль в груди, усталость, потерю веса, отсутствие аппетита, озноб, лихорадку и ночную потливость. [5] Типичная схема лечения латентной инфекции ТБ включает использование изониазида, рифапентина и рифампицина. Режим изменен для тех, у кого развился лекарственно-устойчивый штамм туберкулеза. [6] Обследование на туберкулез включает анализ крови, кожные пробы и рентген грудной клетки. [7] При изучении мазков на туберкулез они окрашиваются кислотостойкими красителями. Эти кислотоустойчивые организмы, такие как Mycobacterium, содержат большое количество липидных веществ в стенках своих клеток, называемых миколиновыми кислотами. Эти кислоты устойчивы к окрашиванию обычными методами, такими как окрашивание по Граму . [8] Его также можно использовать для окрашивания некоторых других бактерий, таких как Nocardia . Реагенты, используемые для окрашивания по Цилю – Нильсену: карбол фуксин , кислый спирт и метиленовый синий . Кислотоустойчивые бациллы после окрашивания становятся ярко-красными.
Грибы
Окрашивание по Цилю – Нильсену представляет собой разновидность окраски от грибка с узким спектром действия. Пятна от грибка с узким спектром действия являются селективными и могут помочь дифференцировать и идентифицировать грибок. [9] Результаты окрашивания по Цилю-Нильсену варьируются, потому что многие клеточные стенки грибов не являются кислотоустойчивыми. [10] Пример распространенного типа кислотоустойчивых грибов, который обычно окрашивают с помощью окрашивания по Цилю-Нильсену, называется Histoplasma (HP). [11] Гистоплазма содержится в почве и фекалиях птиц и летучих мышей. [12] Люди могут заразиться гистоплазмозом при вдыхании спор грибов. Гистоплазма попадает в организм и попадает в легкие, где споры превращаются в дрожжи. [13] Дрожжи попадают в кровоток и поражают лимфатические узлы и другие части тела. Обычно люди не заболевают от вдыхания спор, но если и заболевают, то обычно имеют симптомы гриппа. [14] Другой вариант этого метода окрашивания используется в микологии для дифференциального окрашивания кислотоустойчивых отложений в кутикулярных гифах некоторых видов грибов рода Russula . [15] [16] Некоторые свободные эндоспоры можно спутать с небольшими дрожжами, поэтому окрашивание используется для идентификации неизвестных грибов. [17] Это также полезно для идентификации некоторых простейших, а именно Cryptosporidium и Isospora . Окрашивание по Цилю – Нильсену также может затруднять диагностику в случае парагонимоза, поскольку яйца в образце мокроты на яйцеклетку и паразиты (O&P) могут растворяться пятном, и часто используется в этой клинической обстановке, поскольку признаки и симптомы парагонимоза очень похожи на те из туберкулеза.
История
В 1882 году Роберт Кох открыл этиологию туберкулеза. [18] Вскоре после открытия Коха Пол Эрлих разработал краситель для микобактерий туберкулеза, названный окраской квасцов гематоксилином. [19] Франц Циль затем изменил технику окрашивания Эрлиха, применив карболовую кислоту в качестве протравы. Фридрих Нильсен сохранил протраву, выбранную Цилем, но заменил первичную окраску на карбол-фуксин. Модификации Циля и Нильсена вместе разработали окраску Циля-Нильсена. Еще одно кислотостойкое окрашивание было разработано Джозефом Киньюном с использованием техники окрашивания по Цилю – Нильсену, но с исключением стадии нагревания из процедуры. Это новое пятно от киньюна было названо пятном киньюна.
Процедура
Типичная процедура окрашивания AFB включает падение клеток в суспензии на предметное стекло, затем сушку жидкости на воздухе и фиксацию клеток нагреванием. [20]
Резюме кислотоустойчивого красителя (окраска Циля – Нильсена) [21] | |||||
---|---|---|---|---|---|
Применение | Реагент | Цвет ячейки | |||
Кислотный быстро | Некислотное быстрое | ||||
Первичный краситель | Карбол фуксин | красный | красный | ||
Обесцвечивающее средство | Кислый спирт | красный | Бесцветный | ||
Счетчик пятен | Метиленовый синий / малахитовый зеленый | красный | Синий |
Исследования показали, что окраска AFB без посева имеет плохую прогностическую ценность. Культивирование КУБ необходимо проводить вместе с окрашиванием КУБ; это имеет гораздо более высокую отрицательную прогностическую ценность.
Объяснение механизма
Первоначально карбол-фуксин окрашивает каждую клетку. Когда они очищаются кислотно-спиртовым раствором, окрашиваются только некислотные бактерии, так как у них нет толстого воскового липидного слоя, как у кислотоустойчивых бактерий. Когда применяется контркрашивание, некислотные бактерии захватывают его и становятся синими (метиленовый синий) или зеленым (малахитовый зеленый) при просмотре под микроскопом. Кислотоустойчивые бактерии удерживают карбол-фуксин, поэтому они кажутся красными.
Модификации
- 1% -ный сернокислый спирт для актиномицетов , нокардии .
- 0,5–1% -ный сернокислый спирт для ооцист изоспор , циклоспор .
- 0,25–0,5% сернокислый спирт для бактериальных эндоспор.
- Дифференциальное окрашивание - использовалась ледяная уксусная кислота, нагревание не применялось, вторичное окрашивание - метиленовый синий Лёффлера.
- Также доступна модификация киньюна (или холодная техника Циля – Нильсена).
- Протокол, в котором детергент заменяется высокотоксичным фенолом в окрашивающем растворе фуксина. [25]
Смотрите также
- Среда Левенштейна – Йенсена
- Окраска по Граму
- Kinyoun пятно
- Кислотостойкость
- Франц Циль
- Фридрих Нильсен
Примеры онлайн-протокола
- Протокол Циля – Нильсена ( формат PDF ).
Рекомендации
- ^ Crothers, Джессика W; Лага, Альваро К.; Соломон, Исаак Х (2021 г.). «Клинические характеристики микобактериальной иммуногистохимии в образцах анатомической патологии» . Американский журнал клинической патологии . 155 (1): 97–105. DOI : 10.1093 / ajcp / aqaa119 . ISSN 0002-9173 . PMID 32915191 .
- ↑ Sandman, Кэтлин, Джоан Уилли и Дороти Вуд. Микробиология Прескотта. 11-е изд. Нью-Йорк, Нью-Йорк: Высшее образование Макгроу-Хилла, 2020. Печать. п. 541
- ^ Центры по контролю и профилактике заболеваний. Основные факты о туберкулезе. 11 марта 2016 г. https://www.cdc.gov/tb/topic/basics/default.htm
- ^ Центры по контролю и профилактике заболеваний. Как распространяется туберкулез. 11 марта 2016 г. https://www.cdc.gov/tb/topic/basics/howtbspreads.htm
- ^ Центры по контролю и профилактике заболеваний. Признаки и симптомы. 11 марта 2016 г. https://www.cdc.gov/tb/topic/basics/signsandsymptoms.htm
- ^ Центры по контролю и профилактике заболеваний. Схемы лечения латентной туберкулезной инфекции (ЛТИ). 11 марта 2016 г. https://www.cdc.gov/tb/topic/treatment/ltbi.htm
- ^ Центры по контролю и профилактике заболеваний. Тестирование и диагностика. 11 марта 2016 г. https://www.cdc.gov/tb/topic/testing/default.htm
- ↑ Морелло, Жозефина А., Пол А. Гранато, Марион Э. Уилсон и Верна Мортон. Лабораторное руководство и рабочая тетрадь по микробиологии: приложения к уходу за пациентами. 10-е изд. Бостон: Высшее образование Макгроу-Хилла, 2006. Печать. [ требуется страница ]
- ^ Veerappan, R., Miller, LE, Sosinski, C., & Youngberg, GA (2006) Узкий спектр окрашивания Pityrosporum. Журнал кожной патологии: ноябрь 2006 г., Vol. 33, No. 11, pp. 731-734.
- ^ Хак, A. (2010). Использование специальных красителей при грибковых инфекциях. Подключение: 187-194
- ^ Rajeshwari, М., Xess И., Шарма, МС, и Джейн, Д. (2017). Кислотостойкость гистоплазмы в практике хирургической патологии. Журнал патологии и трансляционной медицины, 51 (5), 482–487. DOI: 10.4132 / jptm.2017.07.11
- ^ Центры по контролю и профилактике заболеваний. Гистоплазмоз. 13 августа 2018 г. https://www.cdc.gov/fungal/diseases/histoplasmosis/index.html .
- ^ Центры по контролю и профилактике заболеваний. Источники гистоплазмоза. 11 февраля 2019 г. https://www.cdc.gov/fungal/diseases/histoplasmosis/causes.html
- ^ Центры по контролю и профилактике заболеваний. Симптомы гистоплазмоза. 13 августа 2018 г. https://www.cdc.gov/fungal/diseases/histoplasmosis/symptoms.html
- ^ Романьези, Х. (1967). Les Russules d'Europe et d'Afrique du Nord . Бордас. ISBN 0-934454-87-6.[ требуется страница ]
- ^ Ларджент, Д; Д Джонсон; Р. Уотлинг (1977). Как отнести грибы к III роду: микроскопические особенности . Mad River Press. п. 25. ISBN 0-916422-09-7.
- ^ Янгберг, Джордж А .; Валлен, Эллен ДБ; Гиоргадзе, Тамар А. (ноябрь 2003 г.). «Узкоспектральное гистохимическое окрашивание грибов». Архив патологии и лабораторной медицины . 127 (11): 1529–30. DOI : 10.5858 / 2003-127-1529-NHSOF . PMID 14567744 .
- ^ ДиНардо, Эндрю Р .; Ланге, Кристоф; Мандалакас, Анна М. (1 мая 2016 г.). «Редакционный комментарий: 1, 2, 3 (года)… и ты ушел: конец 123-летней исторической эры» . Клинические инфекционные болезни . 62 (9): 1089–1091. DOI : 10,1093 / CID / ciw041 . PMID 26839384 .
- ^ Сингхал, Риту; Myneedu, Vithal Prasad (март 2015 г.). «Микроскопия как средство диагностики туберкулеза легких» . Международный журнал микобактериологии . 4 (1): 1–6. DOI : 10.1016 / j.ijmyco.2014.12.006 . PMID 26655191 .
- ^ Лебоффе, Майкл Дж. И Бертон Э. Пирс. Теория и основы применения микробиологической лаборатории. Morton Publishing, 2019. Печать. п. 179. [ необходима страница ]
- ^ Кислотно-стойкое окрашивание - принцип, процедура, интерпретация и примеры. Сагар Арьял, 8 мая 2015 г.
- ^ «Онлайн-микробиологические заметки» . Онлайн-микробиологические заметки . Проверено 29 ноября 2017 .
- ^ «Дом - микробеонлайн» . microbeonline.com . Проверено 29 ноября 2017 .
- ^ Кумар, Суриндер (2012). Учебник микробиологии . п. 315.
- ^ Эллис, RC; Л.А. Заброварный. (1993). «Более безопасный метод окрашивания кислотоустойчивых бацилл» . Журнал клинической патологии . 46 (6): 559–560. DOI : 10.1136 / jcp.46.6.559 . PMC 501296 . PMID 7687254 .
Библиография
- «Микробиология с заболеваниями по системам организма», Роберт В. Бауман, 2009 г., Pearson Education, Inc.
Внешние ссылки
- СМИ, связанные с пятном Циля-Нильсена, на Викискладе?