Calcofluor-white или CFW - это флуоресцентный синий краситель, который используется для связывания с полисахаридными полимерами амебных цист. Он функционирует, будучи способным связываться с полисахаридами 1-3 бета и 1-4 бета на хитине и целлюлозе, которые присутствуют в стенках клеток грибов, растений и водорослей.
В исследованиях биологии клеток растений он используется для окрашивания клеточных стенок как водорослей, так и высших растений . [1] [2]
Он также используется в медицине и биологии животных для идентификации грибов в тканях , [1] [3] [4] (он связывается с хитином в клеточных стенках грибов).
Применение
Медицина
CFW можно использовать как в клинической микологии, так и в паразитологии. Свободноживущие амебы у окулярных видов могут иметь кисты, которые хорошо видны на пятне. Их видели на станциях для промывания глаз в лабораториях. [5] CFW можно использовать с окраской Папаниколау, чтобы усилить реакцию дрожжей в мазках Папаниколау. [6]
Исследовать
В исследованиях калькофлуор-белый также используется для окрашивания шрамов почек дрожжевых клеток, потому что шрамы почек имеют более высокое содержание хитина, который окрашивает их больше, чем остальную клеточную мембрану. Благодаря этому красителю можно подсчитать рубцы почек, что является показателем возраста клетки. Он показывает те же картины окрашивания, что и агглютинин зародышей пшеницы (WGA) . Это особенно полезно для идентификации Mucor и возбудителей из Zygomycosis . Calcofluor-white можно использовать для окрашивания пластинок тека в армированных динофлагеллятах . [7] Calcofluor также используется в качестве красителя для одежды белого цвета, что дает характерный внешний вид при «черном освещении».
Текстиль
CFW - это краситель для осветления тканей. Сначала он водорастворим и бесцветен. Он обладает оптическим осветляющим эффектом, который использовался с 1940-х годов для придания более белого цвета текстилю. Его также добавляют в средства для стирки в коммерческих целях в качестве осветлителя. [8]
Флуоресценция
Водные растворы калькофлюор-уайт имеют спектр поглощения от 300 до 412 нм с пиком при 347 нм. Пик флуоресценции лучше всего проявляется в ультрафиолетовом свете , но фиолетовый / сине-фиолетовый также дает отличные результаты флуоресценции. Calcofluor-White - флуоресцентный краситель , что означает, что длина волны возбуждения и излучения у него отличается друг от друга. Длина волны возбуждения составляет 380 нм, а длина волны излучения - 475 нм. Флуоресценцию лучше всего увидеть в ультрафиолетовом свете, но ее также можно увидеть в фиолетовом или сине-фиолетовом.
Грибы имеют тенденцию проявлять ярко-зеленый цвет в УФ / фиолетовом / фиолетово-синем свете из-за барьерных фильтров, используемых в микроскопии для флуоресценции. Calcofluor white должен тщательно интерпретировать окрашивание, поскольку некоторые неспецифические реакции могут сделать фон флуоресцентным желто-зеленым цветом. Это можно уменьшить, посмотрев на ячейки в синем свете или с помощью других фильтров, чтобы увидеть наилучшее возможное изображение. Синий Эванс является контрастным красителем для калькофлуорового белого, поскольку он может помочь уменьшить фоновые ткани и клетки с синим светом. [9]
Сравнительные исследования
В сравнительном исследовании культур KOH , Calcofluor-White и Fungal для диагностики грибкового онихомикоза CFW был признан наиболее чувствительным методом выявления инфекции у людей. Исследование показало, что из 150 пациентов CFW показал положительный результат у 95 из них. В исследовании также были рассмотрены ключевые преимущества использования красителя Calcofluor-White по сравнению с KOH. Обсуждается, что CFW требует быстрого скрининга, поскольку это можно увидеть на объективах с низким энергопотреблением и может быть выполнено в течение минуты, в то время как KOH требует около 3-4 минут для каждого слайда. Это более быстрый и более чувствительный метод проверки, чем KOH, и фоновый материал можно отобрать с помощью CFC. [10]
При исследовании методов диагностики микозов, грибковой инфекции у людей, CFW сравнивали с KOH и Chicago Sky Blue 6B. CFW показал положительный результат тестирования в 53,4% случаев с подозрением на микоз, в то время как Chicago Sky Blue 6B показал точность 55%. Исследование показало, что CFW менее эффективен для быстрого обнаружения по сравнению с Chicago Sky Blue 6B, но это эффективный способ обнаружения грибковой инфекции. [6]
Исследование, в котором изучалось обнаружение Candida в раковых или предраковых поражениях с использованием CFW с флуоресцентной микроскопией. В ходе исследования хотелось увидеть эффективность Calcofluor-White против разновидностей грибковых инфекций, которые могут привести к смерти или серьезным травмам у пациентов с ослабленным иммунитетом. Он также исследовал чувствительность красителя по сравнению с окрашиванием по Граму и окрашиванием PAS. Исследование пришло к выводу, что это был быстрый и простой способ диагностики в цитопатологии и гистопатологии, но он был относительно дорогостоящим. Исследование также показало, что для эффективного окрашивания не требуется специальных методов. Краситель также не мешает окрашиванию по PAS или Граму. Для цитологии Pap-CFW дал положительный ответ в 50 из 135 раз, а для гистопатологии он дал положительный ответ в 43 из 135 раз только для окрашивания CFW. Исследование показало, что окрашивание улучшилось при сочетании Пап и CFW. Результаты показали, что краситель был невероятно эффективным с точки зрения быстрой диагностики и эффективности, что делало его лучше по сравнению с грамположительными и PAS в этом конкретном исследовании. [11] В целом, окраска имеет ключевые преимущества для исследовательских и диагностических целей, но она стоит немного дороже и не может быть такой точной для определенных видов.
Проблемы с окрашиванием калькофлуором-белым
Были исследования, показывающие, что CFW плохо флуоресцирует с Coccidioides immitis, несмотря на то, что это грибок. Histoplasma capsulatum и Cryptococcus neoformans также имеют тенденцию иметь проблемы с отображением флуоресценции CFW. В другом отчете говорится, что Pneumocystis carinii в биоптатах легких нужно было окрашивать при комнатной температуре в течение пяти минут, а затем при 65 ° C в течение пяти минут, чтобы лучше всего увидеть флуоресценцию. Флуоресценция темно-пигментированных грибов может привести к ошибочным результатам, поскольку зависит от того, насколько хорошо пигментированы грибы и насколько хорошо действует окраска. [5]
Рекомендации
- ^ a b Herth, W .; Э. Шнепф (1980). «Флуорохром, калькофлуор белый, связывает ориентированные со структурными полисахаридными фибриллами». Протоплазма . Springer. 105 (1–2): 129–133. DOI : 10.1007 / BF01279855 . ISSN 0033-183X . S2CID 37459059 .
- ^ Бидхенди, AJ; Chebli, Y; Гайтманн, А (май 2020 г.). «Визуализация флуоресценции целлюлозы и пектина в первичной клеточной стенке растений» . Журнал микроскопии . 278 (3): 164–181. DOI : 10.1111 / jmi.12895 . PMID 32270489 . S2CID 215619998 .
- ^ Hoch, HC; CD Galvani; Д.Х. Саровски; Дж. Н. Тернер (2005). «Два новых флуоресцентных красителя, применимых для визуализации клеточных стенок грибов». Mycologia . 97 (3): 580–588. DOI : 10.3852 / mycologia.97.3.580 . ISSN 0027-5514 . PMID 16392246 .
- ^ Бернс, Эдвард Р .; Wittner M .; Фасковиц Ф. (5 апреля 2005 г.). «Способ обнаружения хитинсодержащих организмов - Патент 6875421» . Проверено 10 ноября 2010 года .
- ^ а б Харрингтон, Брайан Дж .; Хейджейдж, Джордж (май 2003 г.). «Калькофлуор Уайт: Обзор его использования и применения в клинической микологии и паразитологии». Департамент общественного здравоохранения и Департамент микробиологии и иммунологии Медицинского колледжа Огайо, Департамент патологии, Объединенные лаборатории Мерси и Департамент микробиологии и иммунологии Медицинского колледжа Огайо, Толедо, Огайо. Цитировать журнал требует
|journal=
( помощь ) - ^ а б Афшар, Парване; Лариджани, Лале Вахеди; Руханизаде, Хамед (2012–2018 гг.). «Сравнение традиционных экспресс-методов диагностики поверхностных и кожных микозов на основе окрашивания KOH, Chicago sky blue 6B и калькофлюорового белого» . Иранский журнал микробиологии . 10 (6): 433–440. ISSN 2008-3289 . PMC 6414738 . PMID 30873272 .
- ^ Fritz, L. и Triemer, R. 1985. Простая быстрая техника с использованием калькофлюорового белого M2R для визуализации пластинок текальной ткани динофлагеллят. Journal of Phycology, 21: 662-664.
- ^ Hoch, HC; Гальвани, CD; Szarowski, DH; Тернер, Дж. Н. (2005-05-01). «Два новых флуоресцентных красителя, применимых для визуализации клеточных стенок грибов». Mycologia . 97 (3): 580–588. DOI : 10.1080 / 15572536.2006.11832788 . ISSN 0027-5514 . PMID 16392246 . S2CID 203428057 .
- ^ Биологические препараты, Daylnn (сентябрь 2005 г.). «Белое пятно Calcofluor» (PDF) . Dalynn Biologicals . Каталожный № SC15.
- ^ Дасс, С. Маник; Э. В. Винаярадж; Пававни, К .; Паллам, Айшвария; Рао, М. Шринивас (2015). «Сравнение KOH, Calcofluor White и грибковой культуры для диагностики грибкового онихомикоза в городской клинической больнице, Хайдарабад». Индийский журнал исследований микробиологии . 2 (3): 148–153. DOI : 10.5958 / 2394-5478.2015.00004.7 .
- ^ Бхавасар, Рашми СК; Годже, Сантош Кумар; Такалкар, Анант Арунрао; Ganvir, Sindhu M .; Hazarey, Vinay K .; Госави, Сучитра Р. (2010). «Обнаружение Candida с помощью Calcofluor White». Acta Cytologica . 54 (5): 679–684. DOI : 10.1159 / 000325232 . ISSN 0001-5547 . PMID 20968155 . S2CID 3359124 .
Внешние ссылки
- Страница документации продукта от Fluka.
- [1]