коагулаза
Коагулаза представляет собой белковый фермент , продуцируемый несколькими микроорганизмами , который обеспечивает превращение фибриногена в фибрин . В лаборатории он используется для различения различных типов изолятов стафилококка . Важно отметить, что S. aureus , как правило, коагулазо-положительны, а это означает, что положительный тест на коагулазу указывает на присутствие S. aureus или любого из 11 других коагулазо-положительных стафилококков . [1] Отрицательный тест на коагулазу показал бы присутствие коагулазоотрицательных организмов, таких как S. epidermidis илиС. сапрофитный . Однако в настоящее время известно, что не все S. aureus коагулазоположительны. [2] [3] В то время как коагулазоположительные стафилококки обычно являются патогенными , коагулазоотрицательные стафилококки чаще связаны с оппортунистической инфекцией . [4]
Коагулаза реагирует с протромбином в крови. Полученный комплекс называется стафилотромбин , который позволяет ферменту действовать как протеаза для превращения фибриногена, белка плазмы, вырабатываемого печенью, в фибрин. Это приводит к свертыванию крови. Коагулаза прочно связана с поверхностью бактерии S. aureus и при контакте с кровью может покрывать ее поверхность фибрином. Сгусток фибрина может защитить бактерию от фагоцитоза и изолировать ее от других защитных механизмов хозяина. [6] Таким образом, фибриновая оболочка может сделать бактерии более вирулентными. Связанная коагулаза является частью большого семейства белков адгезинов MSCRAMM.
Тест на коагулазу традиционно используется для дифференциации золотистого стафилококка от коагулазонегативных стафилококков . S.aureus продуцирует две формы коагулазы (т.е. связанную коагулазу и свободную коагулазу). Связанная коагулаза, также известная как «фактор слипания» , может быть обнаружена путем проведения теста на коагулазу на предметном стекле, а свободная коагулаза может быть обнаружена с помощью теста на коагулазу в пробирке.
Тест на коагулазу на предметном стекле проводят с отрицательным контролем, чтобы исключить аутоагглютинацию. Две капли физиологического раствора наносят на предметное стекло с номером образца, Тест (Т) и контроль (С). Две капли солевого раствора эмульгируют с тестируемым организмом, используя проволочную петлю, прямую проволоку или деревянную палочку. Каплю плазмы ( рекомендуется кроличья плазма, антикоагулированная ЭДТА ) [7] помещают на каплю инокулированного физиологического раствора, соответствующую тесту, и хорошо перемешивают, затем предметное стекло осторожно покачивают в течение примерно 10 секунд.
Если тест на коагулазу на предметном стекле отрицательный, в качестве подтверждения следует провести пробирочный тест. Слипание обеих капель указывает на аутоагглютинацию, поэтому следует провести тест в пробирке. Пробирочный тест не проводится в каждом учреждении, но большая часть результата зависит от посева крови из лаборатории.
В пробирочном тесте используется кроличья плазма , в которую была инокулирована стафилококковая колония (т. е. грамположительные кокки, положительные по каталазе ). Затем пробирку инкубируют при 37°С в течение 1,5 часов. Если отрицательный, то инкубацию продолжают до 18 часов.
