Изопептаг представляет собой пептидную метку из 16 аминокислот (TDKDMTITFTNKKDAE), которая может быть генетически связана с белками, не препятствуя укладке белков. [1] Изопептаг отличается от других пептидных меток тем, что он может связывать свой связывающий белок постоянной и необратимой ковалентной связью. Другие пептидные метки обычно связывают свои мишени посредством слабых нековалентных взаимодействий, что ограничивает их использование в приложениях, где молекулы испытывают экстремальные силы. Ковалентное связывание изопептагов со своей мишенью преодолевает эти барьеры и позволяет изучать целевые белки в более жестких молекулярных условиях.
Развитие [ править ]
Изопептаг был разработан путем препарирования белка пилина (Spy0128) из Streptococcus pyogenes . Spy0128 содержит два внутримолекулярной изопептида связи , [2] и сформировать isopeptag один из этих облигаций был разделен путем удаления последнего -складчатой в белке.
Способ действия [ править ]
Когда изопептаг связывается с целевым белком, он спонтанно связывает своего связывающего партнера через изопептидную связь . Реакция является устойчивой и протекает при различных температурах от 4 до 37 ° C, в диапазоне pH от 5 до 8 и в присутствии обычно используемых моющих средств. Кроме того, реакция не зависит от окислительно-восстановительного состояния окружающей среды и может одинаково хорошо протекать как в восстановительных, так и в окислительных условиях. [1]
Приложения [ править ]
Ковалентное связывание изопептага с его партнером по связыванию можно использовать для постоянного связывания белков в сложной среде бактериальной клетки, для нацеливания белков, представляющих интерес для визуализации клеток, и для разработки новых белковых структур. [1]
Ссылки [ править ]
- ^ a b c Закери, Биджан; Ховарт, Марк (7 апреля 2010 г.). «Спонтанное образование межмолекулярной амидной связи между боковыми цепями для необратимого нацеливания на пептиды». Журнал Американского химического общества . 132 (13): 4526–4527. DOI : 10.1021 / ja910795a . PMID 20235501 .
- Перейти ↑ Kang, HJ, Coulibaly, F., Clow, F., Proft, T., and Baker, EN (2007). Выявлены стабилизирующие изопептидные связи в структуре ворсинок грамположительных бактерий. Science 318, 1625-1628.
