Анализ белка Лоури - это биохимический анализ для определения общего уровня белка в растворе . Общая концентрация белка отображается изменением цвета раствора образца пропорционально концентрации белка, которую затем можно измерить с помощью колориметрических методов . Он назван в честь биохимика Оливера Х. Лоури, который разработал реагент в 1940-х годах. Его статья 1951 года с описанием этой техники - самая цитируемая статья в научной литературе, процитированная более 300 000 раз. [1] [2] [3]
Механизм
Метод сочетает в себе реакции ионов меди с пептидными связями в щелочных условиях ( тест Биурета ) с окислением остатков ароматических белков . Метод Лоури основан на реакции Cu + , образующегося при окислении пептидных связей, с реагентом Фолин – Чокальтеу (смесь фосфорновольфрамовой кислоты и фосфомолибденовой кислоты в реакции Фолина – Чокальтеу). Механизм реакции недостаточно хорошо изучен, но включает в себя уменьшение реагента Фолины-Чокальтеу и окисление из ароматических остатков ( в основном триптофан , а также тирозин ). Эксперименты показали, что цистеин также реагирует с реагентом. Следовательно, остатки цистеина в белке, вероятно, также вносят вклад в поглощение, наблюдаемое в анализе Лоури. [4] Результатом этой реакции является ярко-синяя молекула, известная как гетерополимолибденовый синий. [5] Концентрация восстановленного реагента фолина (гетерополимолибденовый синий) измеряется по оптической плотности при 660 нм. [6] В результате общая концентрация белка в образце может быть определена по концентрации остатков триптофана и тирозина, которые снижают количество реагента Фолина-Чокальтеу.
Метод был впервые предложен в 1951 году Лоури бицинхониновой кислоты анализа и анализа Хартри-Лоури являются последующие модификации исходной Лоури процедуры.
Смотрите также
Рекомендации
- ^ Ван Ноорден, Р .; Maher, B .; Нуццо, Р. (2014). «100 лучших работ» . Природа . 514 (7524): 550–553. Bibcode : 2014Natur.514..550V . DOI : 10.1038 / 514550a . PMID 25355343 .
- ^ Kresge, N .; Simoni, RD; Хилл, Р.Л. (2005). "Самая цитируемая статья в истории публикаций: определение белков Оливером Х. Лоури" . Журнал биологической химии . 280 (28): e25.
- ^ Гарфилд, Э. (1990). "Самые цитируемые статьи всех времен, SCI 1945-1988. Часть 1A. ТОП-100 SCI - Будет ли когда-нибудь уничтожен метод Лоури?" (PDF) . Текущее содержание . 7 : 3–14.
- ^ Everette, JD; Брайант, QM; Зеленый, AM; Abbey, YA; Wangila, GW; Уокер, РБ (28 июля 2010 г.). «Тщательное изучение реакционной способности различных классов соединений по отношению к реагенту Folin-Ciocalteu» . Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии . 58 (14): 8139–8144. DOI : 10.1021 / jf1005935 . PMC 4075968 . PMID 20583841 .
- ^ Нинфа, Александр Дж. (2010). Фундаментальные лабораторные подходы к биохимии и биотехнологии . Соединенные Штаты Америки: John Wiley & Sons, INC. Стр. 112. ISBN 978-0-470-08766-4.
- ^ Лоури, Огайо; Роузбро, штат Нью-Джерси; Фарр, Алабама; Рэндалл, Р.Дж. (1951). «Измерение содержания белка с фенольным реагентом Folin» (PDF) . Журнал биологической химии . 193 (1): 265–75. DOI : 10.1016 / S0021-9258 (19) 52451-6 . PMID 14907713 .
- Уокер, JM (2002). Справочник по белковым протоколам. Тотова, Нью-Джерси: Humana Press.
Внешние ссылки
- Упрощение метода анализа белка Lowry et al. что более широко применимо
Оценка белка с использованием метода Лоури в Acube Lifesciences