В микроскопии , отрицательное окрашивание является признанным метод, часто используется в диагностической микроскопии, для контрастного тонкого образца с оптический непрозрачной жидкостью . В этой технике фон окрашивается , оставляя фактический образец нетронутым и, следовательно, видимым. Это контрастирует с положительным окрашиванием , при котором окрашивается сам образец.
Светлопольная микроскопия
Для светлопольной микроскопии отрицательное окрашивание обычно выполняется с использованием жидкости для черных чернил, такой как нигрозин и индийские чернила . Образец, например влажную бактериальную культуру, разложенную на предметном стекле, смешивают с отрицательной окраской и дают высохнуть. При просмотре под микроскопом бактериальные клетки и, возможно, их споры кажутся светлыми на темном фоне. Был разработан альтернативный метод с использованием обычного водонепроницаемого маркера для удаления негативного пятна. [1]
Просвечивающая электронная микроскопия
В случае просвечивающей электронной микроскопии непрозрачность для электронов связана с атомным номером , то есть числом протонов. Некоторые подходящие отрицательные пятна включают молибдат аммония , уранил ацетат , уранил формиат , фосфовольфрамовую кислоту , осмий осмий , осмий феррицианиду [2] и auroglucothionate . Они были выбраны потому, что они сильно рассеивают электроны, а также хорошо адсорбируются на биологическом веществе. Структуры, которые могут быть окрашены отрицательно, намного меньше тех, которые изучаются с помощью светового микроскопа. Здесь этот метод используется для просмотра вирусов , бактерий, бактериальных жгутиков , структур биологических мембран и белков или белковых агрегатов, которые все обладают низкой способностью рассеяния электронов. Некоторые красители, такие как четырехокись осмия и феррицианид осмия, очень химически активны. Являясь сильными окислителями, они образуют поперечные сшивки липидов в основном за счет реакции с ненасыщенными углерод-углеродными связями и, таким образом, фиксируют биологические мембраны в образцах тканей и одновременно окрашивают их. [3] [4]
Выбор отрицательного окрашивания при электронной микроскопии может быть очень важным. Раннее исследование вирусов растений с использованием отрицательно окрашенных соусов листьев больного растения показало только сферические вирусы с одним пятном и только палочковидные вирусы с другим. Подтвержденный вывод заключался в том, что это растение страдало от смешанной инфекции двумя отдельными вирусами. Отрицательное окрашивание на уровне как светового микроскопа, так и электронного микроскопа никогда не следует проводить с инфекционными организмами, если не соблюдаются строгие меры безопасности. Отрицательное окрашивание обычно является очень мягким методом подготовки и, таким образом, не снижает вероятность заражения оператора.
Другие приложения
Просвечивающая электронная микроскопия с отрицательным окрашиванием также успешно применялась для изучения и идентификации водных липидных агрегатов, таких как ламеллярные липосомы (le), инвертированные сферические мицеллы (M) и инвертированные гексагональные цилиндрические фазы HII (H) (см. Рисунок). [5]
Рекомендации
- ^ Woeste, S; Демчик, П. (1991). «Новая версия негативного пятна» . Прикладная и экологическая микробиология . Американское общество микробиологии. 57 (6): 1858–1859. DOI : 10.1128 / aem.57.6.1858-1859.1991 . ISSN 0099-2240 . PMC 183484 . PMID 1714705 .
- ^ Д. Чедвик (2002). Роль саркоплазматической сети в гладких мышцах . Джон Уайли и сыновья. С. 259–264 . ISBN 0-470-84479-5.
- ^ Боццола, Джон Дж .; Рассел, Лонни Д. (1999). «Подготовка образцов для просвечивающей электронной микроскопии» . Электронная микроскопия: принципы и методы для биологов . Садбери, Массачусетс: Джонс и Бартлетт. С. 21–31. ISBN 978-0-7637-0192-5.
- ^ М.А. Хаят (2000). Принципы и методы электронной микроскопии: биологические приложения . Издательство Кембриджского университета. С. 45–61. ISBN 0-521-63287-0.
- ^ Яшрой, RC (1990). «Пластинчатая дисперсия и фазовое разделение липидов мембран хлоропластов с помощью электронной микроскопии с отрицательным окрашиванием». Журнал биологических наук . ООО "Спрингер Сайенс энд Бизнес Медиа". 15 (2): 93–98. DOI : 10.1007 / bf02703373 . ISSN 0250-5991 . S2CID 39712301 .
Внешние ссылки
- «Негативное окрашивание для манекенов» . Проверено 6 июня 2009 .
- «Отрицательное окрашивание» . Архивировано из оригинала на 2012-12-25 . Проверено 6 июня 2009 .