Из Википедии, бесплатной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску

Радиальной иммунодиффузии (РИД) или метод Манчини, Манчини иммунодиффузии или одного радиального анализа иммунодиффузии, является иммунодиффузии метод , используемый в иммунологии для определения количества или концентрации в качестве антигена в образце.

Описание [ править ]

Подготовка [ править ]

Раствор, содержащий антитело , добавляют к нагретой среде, такой как агар или агароза, растворенные в забуференном физиологическом растворе . Затем расплавленную среду выливают на предметное стекло микроскопа или в открытый контейнер, например чашку Петри , и дают ей остыть и образовывать гель . [1] [2] [3] Затем раствор, содержащий антиген, помещают в лунку, которая пробивается в геле. [2] [3] [4] Затем предметное стекло или контейнер накрывают или закрывают, чтобы предотвратить испарение. [2] [3] [4]

Антиген радиально диффундирует в среду, образуя круг преципитина, который отмечает границу между антителом и антигеном. [1] диаметр круга увеличивается со временем , как антиген диффундирует в среде, вступает в реакцию с антителом, и нерастворимые формы преципитации комплексов . [1] [2] [5] Антиген количественно определяется путем измерения диаметра круга преципитина и сравнения его с диаметром кружков преципитина, образованных известными количествами или концентрациями антигена. [1] [2] [3] [6]

Комплексы антиген-антитело малы и растворимы в избытке антигена. Поэтому осаждение около центра круга обычно менее плотное, чем около внешнего края круга, где антиген менее сконцентрирован. [1] [2]

Расширение круга достигает конечной точки и прекращается, когда свободный антиген истощается и когда антиген и антитело достигают эквивалентности. [1] [2] [5] Однако четкость и плотность внешнего края круга могут продолжать увеличиваться после того, как круг перестанет расширяться. [1]

Интерпретация [ править ]

Для большинства антигенов площадь и квадрат диаметра круга в конечной точке круга прямо пропорциональны количеству антигена и обратно пропорциональны концентрации антитела. [1] [2] [5] Следовательно, график, на котором сравниваются количества или концентрации антигена в исходных образцах с площадями или квадратами диаметров кружков преципитина на линейных масштабах , обычно будет прямой линией после всех кружков. достигли своих конечных точек (метод эквивалентности). [1] [3] [5] [6]

Круги, которые создают небольшие количества антигена, достигают своих конечных точек раньше, чем круги, создаваемые большими количествами. [1] [2] [5] Следовательно, если площади или диаметры кругов измеряются в то время, когда некоторые, но не все круги перестают расширяться, такой график будет прямым в той части, которая содержит меньшие количества или концентрации антигена и будет изогнутым в той части, которая содержит большие количества или концентрации. [1] [5]

Хотя круги все еще расширяются, график, на котором сравниваются количества или концентрации антигена в логарифмической шкале с диаметрами или площадями кругов в линейном масштабе, может быть прямой линией (кинетический метод). [1] [2] [4] [5] [6] [7] Однако круги в осадке меньше и менее отчетливы во время расширения, чем после того, как расширение закончилось. [1] [5] Кроме того, температура влияет на скорость расширения, но не влияет на размер круга в его конечной точке. [1]Кроме того, диапазон диаметров кружков для одних и тех же количеств или концентраций антигена меньше, в то время как некоторые кружки увеличиваются, чем после того, как все кружки достигли своих конечных точек. [1] [5]

Количество и концентрация нерастворимых комплексов антиген-антитело на внешнем крае круга со временем увеличиваются. [1] Ясность и плотность внешнего края круга, таким образом, также увеличиваются со временем. [1] В результате измерения размеров кругов и графиков, полученные на основе этих измерений, часто бывают более точными после того, как круги перестали расширяться, чем когда круги все еще увеличиваются. [1] По этим причинам часто более желательно проводить измерения после того, как все круги достигли своих конечных точек, чем проводить измерения, пока некоторые или все круги все еще увеличиваются. [1]

Измерения больших кругов более точны, чем измерения маленьких кругов. [1] [8] Поэтому часто желательно регулировать концентрацию антитела и количество антигена, чтобы гарантировать, что кольца преципитина будут большими. [1]

Методы радиальной иммунодиффузии [ править ]

  • Измерение кругов при расширении всех (кинетический метод) [4]
  • Измерение окружностей после того, как все достигли своих конечных точек (метод эквивалентности) [2] [3]

Ссылки [ править ]

  1. ^ a b c d e f g h i j k l m n o p q r s t u Berne BH (1974-01-01). «Различная методология и уравнения, используемые для количественного определения иммуноглобулинов с помощью радиальной иммунодиффузии - сравнительная оценка известных и коммерческих методов» (PDF) . Клиническая химия . Вашингтон, округ Колумбия: Американская ассоциация клинической химии . 20 (1): 61–69. DOI : 10.1093 / clinchem / 20.1.61 . ISSN  0095-1137. LCCN  58002529 . OCLC  43430009 . PMID  4203461 . Архивировано из оригинального (PDF) 08.08.2017 . Проверено 15 ноября 2015 .
  2. ^ Б с д е е г ч я J K Дэвис Северная Каролина, Хо М (1976). «Глава 2: Количественное определение иммуноглобулинов: радиальная иммунодиффузия» . В Rose N, Friedman H (ред.). Руководство по клинической иммунологии . Вашингтон, округ Колумбия : Американское общество микробиологии . С. 5–8. ISBN 0-914826-09-3. LCCN  76017595 . OCLC  1036571523 . Проверено 14 июня 2019 г. - из интернет-архива .
  3. ^ Б с д е е Stanley J (2002). «Глава 12: Осаждение: одиночная радиальная иммунодиффузия: лабораторный метод 12-1: Радиальный иммунодиффузионный тест» . Основы иммунологии и серологии . Олбани, Нью-Йорк : подразделение Delmar of Thomson Learning . С. 172–174. ISBN 978-0914826255. LCCN  2002280630 . OCLC  1149023866 . Проверено 15 мая 2017 г. - из интернет-архива .
  4. ^ a b c d Лаборатория стоматологической микробиологии LSUMC / MIP (2002). «II. Лабораторная работа: Б. Радиальная иммунодиффузия» . Упражнение 3: Антиген-Антитело я . Новый Орлеан, Луизиана : Медицинский факультет Университета штата Луизиана : Департамент микробиологии, иммунологии и паразитологии . Проверено 14 ноября 2015 . Архивировано 4 августа 2004 года на Wayback Machine .
  5. ^ a b c d e f g h i (1) Манчини Дж., Карбонара А. О., Хереманс Дж. Ф. (сентябрь 1965 г.). «Иммунохимическое количественное определение антигенов методом однократной радиальной иммунодиффузии» . Иммунохимия . Оксфорд , Англия : Pergamon Press . 2 (3): 235–254. DOI : 10.1016 / 0019-2791 (65) 90004-2 . ISSN 0019-2791 . LCCN 64009461 . OCLC 53097967 . PMID 4956917 . Источник 2020-07-08    - через ScienceDirect .
    (2) Манчини Дж., Верман Дж. П., Карбонара А. О., Хереманс Дж. Ф. (декабрь 1964 г.). Петерс, Хуберт (ред.). Одно-радиально-диффузионный метод иммунологического количественного определения белков . Протиды биологических жидкостей: материалы 11-го коллоквиума, Брюгге , Бельгия (1963) . Амстердам , Нидерланды : Эльзевир . С. 370–373. OCLC 25285708 . Проверено 8 июля 2020 г. - через Google Книги .  Архивировано 9 декабря 2019 года в Wayback Machine .
  6. ^ а б в Парвез Z (1984). «Глава 4: Обзор иммунологических методов: радиальная иммунодиффузия (RID)» . Иммуноанализы в тестировании коагуляции . Нью-Йорк: Springer-Verlag . С. 21–22. DOI : 10.1007 / 978-1-4615-7225-1_5 . ISBN 9781461572251. LCCN  83020115 . OCLC  851823206 . Проверено 8 июля 2020 . Архивировано 8 июля 2020 года в Wayback Machine .
  7. ^ Фейи ДЛ, МакКелви Е.М. (1965-01-01). «Количественное определение сывороточных иммуноглобулинов в чашках с антителами и агаром» (PDF) . Журнал иммунологии . Балтимор, Мэриленд : Американская ассоциация иммунологов . 94 (1): 84–90. ISSN 1048-3233 . LCCN sf85007036 . OCLC 204767467 . PMID 14253527 . Проверено 8 июля 2007 .      Архивировано 25 февраля 2018 года на Wayback Machine .
  8. ^ Калфф, МВт (март 1970 г.). «Количественное определение сывороточных уровней иммуноглобулинов с помощью однократной радиальной иммунодиффузии» . Клиническая биохимия . Эльзевир . 3 (1): 91–104. DOI : 10.1016 / S0009-9120 (70) 80011-X . PMID 4110625 . Источник 2021-01-10 - через ScienceDirect . 4. Коэффициент вариации из иммуноглобулинов определений в одной партии тест - сыворотке повторно количественно в течение десяти месяцев, был принят в качестве меры для воспроизводимости метода. Этот коэффициент составлял 8,5% для IgG , 5,8% для IgA и 4,4% для IgM . Уровни иммуноглобулина в этой тестовой сыворотке лежат в среднем диапазоне калибровочных линий . Точность метода возрастает с увеличением высоты калибровочной линии. Архивировано 10 января 2021 года в Wayback Machine .

Дальнейшее чтение [ править ]

  • Манчини Дж. (1992-06-29). "Цитирование на этой неделе Classic: Улучшение ангелотрона" (PDF) . Текущее содержание . 35 (26): 9. ISSN  0272-1449 . OCLC  6568530 . Проверено 7 августа 2017 . Архивировано 7 августа 2017 года на Wayback Machine .
  • Ritzmann SE (июль 1978 г.). «Возвращение к радиальной иммунодиффузии. Часть 1» (PDF) . Лабораторная медицина . Американское общество клинической патологии и издательство Оксфордского университета . 9 (7): 23–33. DOI : 10.1093 / labmed / 9.7.23 . ISSN  1943-7730 . OCLC  614490269 . Архивировано из оригинала (PDF) на 2017-10-29 . Проверено 29 октября 2017 .
  • Ритцманн С.Е. (август 1978 г.). «Возвращение к радиальной иммунодиффузии. Часть 2. Применение и интерпретация тестов RID» (PDF) . Лабораторная медицина . Американское общество клинической патологии и издательство Оксфордского университета . 9 (8): 27–40. DOI : 10.1093 / labmed / 9.8.27 . ISSN  1943-7730 . OCLC  614490269 . Архивировано из оригинального (PDF) 07 августа 2017 года . Проверено 7 августа 2017 .
  • Тейлор Р. Н., Фулфорд К. М., Хыонг А. Ю. (июль 1978 г.). «Сравнение кинетических и конечных методов диффузии для количественного определения сывороточных иммуноглобулинов человека» (PDF) . Журнал клинической микробиологии . Вашингтон, округ Колумбия: Американское общество микробиологии . 8 (1): 23–27. ISSN  0095-1137 . OCLC  909257436 . PMC  275108 . PMID  97309 . Проверено 6 августа 2020 . Архивировано 5 июля 2020 года в Wayback Machine .

Внешние ссылки [ править ]

  • Бхаттачарджи С. (29 ноября 2013 г.). «Радиальная иммунодиффузия» (видео) . Биология Сёму . Проверено 27 июня 2016 - через YouTube . Вступительный видеоролик по теории и технике радиальной иммунодиффузии (10:21 мин.).
  • Шейх С (24 сентября 2015 г.). «Радиальная иммунодиффузия (Учебный комплект)» (видео) . Проверено 13 мая 2017 г. - через YouTube . Вступительное видео, демонстрирующее технику радиальной иммунодиффузии (3:43 минуты).
  • «Радиальная иммунодиффузия (техника Манчини)» (видео) . Откровенные лекции . 2017-08-08 . Проверено 31 июля 2020 г. - через YouTube .Вводная лекция / слайд-шоу, иллюстрирующие теорию и технику радиальной иммунодиффузии. (6:56 мин.)
  • «Радиальная иммунодиффузия» . Edvotek, Inc., 2017. Архивировано из оригинала (фотография) 07.08.2017 . Проверено 7 августа 2017 . Фотография кружков преципитина в чашке Петри при радиальной иммунодиффузии.