Супероптимальный бульон ( среда SOB ) - это богатая питательными веществами среда для выращивания бактерий, используемая для микробиологической культуры , как правило, Escherichia coli . Этот богатый питательными веществами микробный бульон содержит пептиды , аминокислоты, водорастворимые витамины и глюкозу в составе с низким содержанием соли. Он был разработан Дугласом Ханаханом в 1983 году и представляет собой адаптированную версию обычно используемой среды LB ( бульон для лизогенизации ). Рост E. coli в среде SOB или SOC приводит к более высокой эффективности трансформации плазмид . [1] [2]Среду SOC также можно использовать для регенерации штаммов Klebsiella oxytoca для повышения эффективности трансформации.
Супероптимальный бульон с подавлением катаболитов ( SOC ) - это SOB с добавленной глюкозой . [3]
Состав
(В скобках указаны массы, необходимые для создания 1 литра среды)
SOB
- 2% триптона (20 г)
- 0,5% мас. / Об. Дрожжевой экстракт (5 г)
- 8,56 мМ NaCl (0,5 г) или 10 мМ NaCl (0,584 г)
- 2,5 мМ KCl (0,186 г)
- dd H 2 O до 1000 мл [4]
- 10 мМ MgCl 2 (безводный: 0,952 г; гексагидрат: 2,033 г) И 10 мМ MgSO 4 (безводный: 1,204 г; гептагидрат: 2,465 г) [2]
SOC
Помимо содержания SOB, SOC также содержит 20 мМ глюкозы (3,603 г).
В качестве альтернативы, SOB и SOC могут быть получены путем добавления небольших количеств концентрированных растворов хлорида магния и глюкозы к предварительно приготовленному SOB.
регулировка pH
Для максимальной эффективности pH среды SOB / SOC следует довести до 7,0 путем добавления концентрированного гидроксида натрия . [3] В оригинальной литературе указано, что pH конечной среды должен быть от 6,8 до 7,0.
Стерилизация
Наконец, среду SOB следует автоклавировать при 121 ° C для обеспечения стерильности . Компоненты среды SOC не следует автоклавировать вместе, поскольку высокая температура может вызвать реакцию глюкозы с триптическими пептидами (см. Реакцию Майяра ), что ухудшит качество. Растворы SOB и добавок магния и глюкозы можно автоклавировать отдельно и затем смешивать до конечных концентраций. Полный SOC можно стерилизовать фильтрованием через фильтр 0,22 мкм.
Рекомендации
- ^ Hanahan, D. (1983). «Исследования по трансформации Escherichia coli плазмидами». Журнал молекулярной биологии . 166 (4): 557–580. DOI : 10.1016 / S0022-2836 (83) 80284-8 . PMID 6345791 .
- ^ a b SOC Средний
- ^ а б [1]
- ^ SOC средний