Технология QMCF — это эписомальная система производства белка , в которой используются генетически модифицированные клетки млекопитающих и специально разработанные плазмиды . Плазмиды QMCF несут комбинацию регуляторных последовательностей из точки начала репликации ДНК мышиного полиомавируса (Py) , которая в сочетании с сайтом связывания белка EBNA-1 вируса Эпштейна-Барра (EBV) в качестве ядерных удерживающих элементов обеспечивает стабильное размножение плазмид в клетках млекопитающих. Кроме того, векторы несут маркер селекции, используемый для отбора бактерий , несущих плазмиды , и клеток QMCF, бактериальную точку начала репликации ColE1 и кассету для экспрессии интересующего белка. Клеточные линии QMCF экспрессируют антиген Large-T и белки EBNA-1, которые связывают вирусные последовательности на плазмиде QMCF и, следовательно, поддерживают репликацию и поддержание плазмиды в клетках. Технология QMCF имеет несколько важных отличий от общеизвестных систем экспрессии временной экспрессии и стабильных клеточных линий. В отличие от системы временной экспрессии, технология QMCF позволяет поддерживать эписомально реплицирующиеся плазмиды QMCF внутри клеток до 50 дней, что обеспечивает возможность фазы производства продолжительностью 2–3 недели. Таким образом, уровень производства технологии QMCF выше (до 1 г/л). Еще одним отличием является возможность создания банков экспрессирующих клеток в течение одной недели, что невозможно при использовании временной системы. По сравнению с использованием стабильной клеточной линии технология QMCF представляет собой быстрый метод, исключающий трудоемкий этап отбора клонов во время разработки клеточной линии.
Технология QMCF может использоваться для производства белков, антител и вирусоподобных частиц для фундаментальных исследований и фармацевтических разработок. [1]
Процесс производства белка начинается с клонирования кДНК целевой молекулы в вектор экспрессии QMCF . После этого 1-6 мкг плазмидной ДНК трансфицируют электропорацией в клетки QMCF ( клетки на основе CHO или HEK293 ) для экспрессии в бессывороточной суспензии. Поскольку плазмиды QMCF содержат ген устойчивости к антибиотикам и способны стабильно реплицироваться и оставаться внутри делящихся клеток, происходит селекция и рост культуры клеток . Это позволяет масштабировать производство до желаемых объемов. Наконец, процесс переводится на производственную стадию путем изменения температуры среды до 30 ̊C.