Из Википедии, бесплатной энциклопедии
Перейти к навигации Перейти к поиску
Сетчатка (часть глаза ) окрашена гематоксилином и эозином , ядра клеток окрашены в сине-фиолетовый цвет, а внеклеточный материал окрашен в розовый цвет.

Гематоксилин и эозин пятно ( или гематоксилин и эозин пятно или гематоксилин-эозин пятно , часто сокращенно обозначаемый как H & E пятно или HE пятно ) является одним из основных тканей пятен , используемых в гистологии . [1] [2] [3] Это наиболее широко используемое пятно в медицинской диагностике [1] и часто является золотым стандартом . [4] Например, когда патолог смотрит на биопсию предполагаемого рака , гистологический срез может быть окрашен H&E.

H&E представляет собой комбинацию двух гистологических красителей: гематоксилин и эозин . Гематоксилин окрашивает ядра клеток в синий цвет, а эозин окрашивает внеклеточный матрикс и цитоплазму в розовый цвет, при этом другие структуры приобретают разные оттенки, оттенки и комбинации этих цветов. [5] [6] Таким образом, патолог может легко различить ядерную и цитоплазматическую части клетки, и, кроме того, общая картина окраски пятна показывает общее расположение и распределение клеток и дает общий обзор образца ткани. состав. [7] Таким образом, распознавание образов, как самими опытными людьми, так ис помощью программного обеспечения, которое помогает этим экспертам , предоставляет гистологическую информацию.

Эта комбинация красителей была впервые введена в 1876 г. А. Виссовским. [8] [7]

Использует [ редактировать ]

Процедура окрашивания H&E является основным методом окрашивания в гистологии [3] [7] [2] [5] отчасти потому, что ее можно сделать быстро, [7] не дорого и окрашивает ткани таким образом, что значительное количество микроскопическая анатомия [9] [10] раскрыта, [7] [5] [4] и может использоваться для диагностики широкого спектра гистопатологических состояний. [8] Результаты окрашивания H&E не сильно зависят от химического вещества, используемого для фиксации ткани, или незначительных несоответствий в лабораторном протоколе [11], и эти факторы способствуют его рутинному использованию в гистологии. [7]

Окрашивание H&E не всегда обеспечивает достаточный контраст, чтобы различить все ткани, клеточные структуры или распределение химических веществ [9], и в этих случаях используются более специфические окрашивания и методы. [10] [7]

Способ применения [ править ]

Основные статьи: Гистология § Подготовка образцов и гематоксилин
Стойку слайдов удаляют из ванны с пятном гематоксилина.

Есть много способов приготовления растворов (составов) гематоксилина, используемых в процедуре H&E, [11] [12] [6], кроме того, существует множество лабораторных протоколов для изготовления слайдов, окрашенных H&E, [9] некоторые из которых могут быть специфичными. в определенную лабораторию. [7] Хотя стандартной процедуры не существует, [11] [9] результаты по соглашению достаточно согласуются с тем, что ядра клеток окрашиваются в синий цвет, а цитоплазма и внеклеточный матрикс окрашиваются в розовый цвет. [7] Гистологические лаборатории могут также регулировать количество или тип окрашивания для конкретного патолога. [7]

После того, как ткани собраны (часто в виде биопсии ) и зафиксированы, их обычно обезвоживают и заливают расплавленным парафином , полученный блок устанавливают на микротом и разрезают на тонкие срезы. [6] Срезы прикрепляют к предметным стеклам микроскопа, после чего воск удаляют растворителем, а срезы ткани, прикрепленные к предметным стеклам, повторно гидратируются и готовы к окрашиванию. [6] Кроме того, окрашивание H&E является наиболее часто используемым красителем в хирургии Мооса, при которой ткани обычно замораживают, разрезают на криостате (микротоме, который разрезает замороженные ткани), фиксируют в спирте и затем окрашивают. [9]

Метод окрашивания H&E включает нанесение гематоксилина, смешанного с солью металла или протравы , часто с последующим ополаскиванием слабым кислотным раствором для удаления избыточного окрашивания ( дифференциация ) с последующим посинением в слабощелочной воде. [13] [8] [14] После нанесения гематоксилина, ткань контрастна с эозином (наиболее часто эозином Y ). [6] [8] [7]

Результаты [ править ]

Гематоксилин Принципиально цвета на ядра из клеток синий или темно-фиолетовые, [6] [15] [14] вместе с несколькими другими тканями, такие как кератогиалиновые гранулами и кальцинированной материала. Эозин окрашивает цитоплазму и некоторые другие структуры, включая внеклеточный матрикс, такой как коллаген [5] [7] [14], до пяти оттенков розового. [8] эозинофильное (вещества, которые окрашивали с помощью эозина) [5] структура , как правило , состоит из внутриклеточных или внеклеточных белков . ВТельца Леви и Мэллори органов являются примерами эозинофильных структур. Большая часть цитоплазмы эозинофильная и имеет розовый цвет. [10] [15] Красные кровяные тельца сильно окрашиваются в красный цвет.

Способ действия [ править ]

Хотя гематеин , окисленная форма гематоксилина, [5] [16] [14] является активным красителем (в сочетании с протравой), краситель по-прежнему называют гематоксилином . [8] [13] Гематоксилин в сочетании с протравой (чаще всего алюминиевыми квасцами ) часто считается «похожим» [10] на основное, положительно заряженное или катионное пятно. [5] Эозин - это анионное (отрицательно заряженное) и кислотное пятно. [5] [10] Окрашивание ядер гемалом (комбинация ионов алюминия и гематеина)[14] обычно происходит из-за связывания комплекса краситель-металл с ДНК, но ядерное окрашивание может быть получено после экстракции ДНК [14] из срезов ткани. Механизм отличается от механизма окрашивания ядер основными (катионными) красителями, такими как тионин или толуидиновый синий . [10] Окрашивание основными красителями происходит только в менее кислых растворах, чем гемалум, и предотвращается путем предварительной химической или ферментативной экстракции нуклеиновых кислот. Имеются данные, указывающие на то, что координационные связи, подобные тем, которые удерживают вместе алюминий и гематеин, связывают комплекс гемала с ДНК и карбоксильными группами белков в ядерном хроматине .

Структуры не обязательно должны быть кислотными или основными, чтобы их можно было назвать базофильными или эозинофильными; терминология основана на сродстве клеточных компонентов к красителям. В образце могут присутствовать другие цвета, например желтый и коричневый; они вызваны внутренними пигментами, такими как меланин . Базальные пластинки необходимо окрасить пятном PAS или некоторыми серебряными пятнами , если они должны быть хорошо видны. Ретикулярные волокна также требуют окраски серебром. Гидрофобные структуры также имеют тенденцию оставаться прозрачными; они обычно богаты жирами, например адипоцитами , миелином вокруг аксонов нейронов и мембранами аппарата Гольджи .

Примеры тканей, окрашенных H&E [ править ]

  • Хрящ , ядра клеток (сине-пурпурный), внеклеточный материал (розовый).

  • Протоковая карцинома in situ (DCIS) в ткани груди, ядрах клеток (сине-пурпурный), внеклеточном материале (розовый).

  • Ткань легкого, взятая у пациента с эмфиземой . Ядра клеток (сине-пурпурный), красные кровяные тельца (ярко-красные), тела других клеток и внеклеточный материал (розовый) и воздушные пространства (белые).

  • Мышечная ткань , ядра клеток (сине-пурпурный), внеклеточный материал (розовый).

  • Базальная карцинома из кожи , клеточные ядра (сине-фиолетовый), внеклеточный материал (розовый).

Ссылки [ править ]

  1. ^ a b Титфорд, М. (2005). «Долгая история гематоксилина». Биотехника и гистохимия . 80 (2): 73–80. DOI : 10.1080 / 10520290500138372 . PMID  16195172 . S2CID  20338201 .
  2. ^ а б Смит C (2006). «Наш долг бревенчатому дереву: история гематоксилина» . MLO Med Lab Obs . 38 (5): 18, 20–2. PMID 16761865 . 
  3. ^ a b Дапсон RW, Хоробин RW (2009). «Красители с точки зрения ХХI века» . Biotech Histochem . 84 (4): 135–7. DOI : 10.1080 / 10520290902908802 . PMID 19384743 . S2CID 28563610 .  
  4. ^ а б Розай J (2007). «Почему микроскопия останется краеугольным камнем хирургической патологии» . Lab Invest . 87 (5): 403–8. DOI : 10.1038 / labinvest.3700551 . PMID 17401434 . 
  5. ^ Б с д е е г ч Чан JK (2014). «Прекрасные цвета окраски гематоксилин-эозином в диагностической хирургической патологии» . Int J Surg Pathol . 22 (1): 12–32. DOI : 10.1177 / 1066896913517939 . PMID 24406626 . S2CID 26847314 .  
  6. ^ Б с д е е Stevens, Алан (1982). «Гематоксилины». В Бэнкрофте, Джон; Стивенс, Алан (ред.). Теория и практика гистологических методов (2-е изд.). Longman Group Limited. п. 109.
  7. ^ Б с д е е г ч я J K L Wittekind D (2003). «Традиционное окрашивание для рутинной диагностики патологии, включая роль дубильной кислоты. 1. Значение и ограничения окрашивания гематоксилин-эозином» . Biotech Histochem . 78 (5): 261–70. DOI : 10.1080 / 10520290310001633725 . PMID 14989644 . S2CID 10563849 .  
  8. ^ Б с д е е Titford, Майкл (2009). «Прогресс в развитии микроскопических методов диагностики патологии». Журнал гистотехнологии . 32 (1): 9–19. DOI : 10.1179 / his.2009.32.1.9 . ISSN 0147-8885 . S2CID 26801839 .  
  9. ^ а б в г д Ларсон К., Хо ХХ, Anumolu PL, Chen TM (2011). «Окрашивание ткани гематоксилином и эозином в микрографической хирургии Мооса: обзор» . Dermatol Surg . 37 (8): 1089–99. DOI : 10.1111 / j.1524-4725.2011.02051.x . PMID 21635628 . S2CID 2538853 .  CS1 maint: несколько имен: список авторов ( ссылка )
  10. ^ a b c d e f Росс, Майкл Х .; Павлина, Войцех (2016). Гистология: текст и атлас: взаимосвязанная клеточная и молекулярная биология (7-е изд.). Wolters Kluwer. с. 984 с. ISBN 978-1451187427.
  11. ^ a b c Шульте EK (1991). «Стандартизация биологических красителей и красителей: подводные камни и возможности» . Гистохимия . 95 (4): 319–28. DOI : 10.1007 / BF00266958 . PMID 1708749 . S2CID 29628388 .  
  12. Перейти ↑ Llewellyn BD (2009). «Окрашивание ядер квасцами гематоксилином» . Biotech Histochem . 84 (4): 159–77. DOI : 10.1080 / 10520290903052899 . PMID 19579146 . S2CID 205713596 .  
  13. ^ a b Ортис-Идальго C, Пина-Овьедо S (2019). «Гематоксилин: дар гистопатологии Мезоамерики. Пало-де-Кампече (бревенчатое дерево), самое желанное сокровище пиратов и незаменимое пятно на тканях» . Int J Surg Pathol . 27 (1): 4–14. DOI : 10.1177 / 1066896918787652 . PMID 30001639 . 
  14. ^ Б с д е е Kiernan JA (2018). «Вовлекает ли прогрессирующее окрашивание ядер гемалом (гематоксилином квасцов) ДНК и какова природа комплекса краситель-хроматин?» . Biotech Histochem . 93 (2): 133–148. DOI : 10.1080 / 10520295.2017.1399466 . PMID 29320873 . S2CID 13481905 .  
  15. ^ a b Лисон, Томас С .; Лисон, К. Роланд (1981). Гистология (Четвертое изд.). Компания WB Saunders. п. 600. ISBN 978-0721657042.
  16. ^ Кар, Барт; Ловелл, Скотт; Субрамони, Ананд (1998). «Прогресс экстракции бревен». Хиральность . 10 (1–2): 66–77. DOI : 10.1002 / chir.12 .

Дальнейшее чтение [ править ]

  • Кирнан Дж. А. (2008) Гистологические и гистохимические методы: теория и практика. 4-е изд. Блоксхэм, Великобритания: Scion.
  • Лилли Р.Д., Пиццолато П., Дональдсон П.Т. (1976) Окрашивание ядер растворимыми метахромными протравными красителями. Эффект от реакций блокировки химических концевых групп и искусственного введения кислотных групп в ткани. Гистохимия 49: 23–35.
  • Llewellyn BD (2009) Окрашивание ядер квасцами-гематоксилином. Биотех. Histochem. 84: 159–177.
  • Пухтлер Х., Мелоан С.Н., Уолдроп Ф.С. (1986) Применение современных химических концепций к окрашиванию металлическим гематеином и -бразилеином. Гистохимия 85: 353–364.

Внешние ссылки [ править ]

  • Информационный букварь SIGMA-ALDRICH H&E

Протокол [ править ]

  • Обычный гематоксилин Майера и краситель эозина (H&E)
  • Протокол окрашивания гематоксилином и эозином (H&E)
  • Rosen Lab, Департамент молекулярной и клеточной биологии, Медицинский колледж Бейлора) Пошаговый протокол