Лизогении бульон ( LB ) является питательно богатой средой в основном используется для роста из бактерий . Его создатель, Джузеппе Бертани , предназначенный LB стоять лизогении бульона , [1] , но LB также пришла к разговорному среднему Лурии бульону , Lennox бульону или Лурия-Бертани . Формула среды LB была опубликована в 1951 году в первой статье Бертани по лизогении . В этой статье он описал модифицированный одиночный импульсный эксперимент.и выделение фагов P1 , P2 и P3 . Он разработал среду LB для оптимизации роста шигелл и образования бляшек . [1] [2]
Составы сред LB были промышленным стандартом для выращивания Escherichia coli еще в 1950-х годах. [3] [4] [5] [6] [7] Эти среды широко используются в молекулярной микробиологии для получения плазмидной ДНК и рекомбинантных белков. Он продолжает оставаться одной из наиболее распространенных сред, используемых для содержания и культивирования лабораторных рекомбинантных штаммов Escherichia coli . [8] Однако для физиологических исследований использование среды LB не рекомендуется. [9]
Есть несколько распространенных формулировок LB. Хотя они разные, они, как правило, имеют схожий состав ингредиентов, используемых для стимулирования роста, в том числе следующие:
- Пептиды и казеиновые пептоны
- Витамины (в том числе витамины группы B)
- Микроэлементы (например, азот, сера, магний)
- Минералы
Ионы натрия для транспорта и осмотического баланса обеспечивают хлорид натрия . Триптон используется для обеспечения незаменимых аминокислот, таких как пептиды и пептоны, для растущих бактерий, а дрожжевой экстракт используется для обеспечения множества органических соединений, полезных для роста бактерий. Эти соединения включают витамины и определенные микроэлементы.
В своей оригинальной статье 1951 года Бертани использовал 10 граммов NaCl и 1 грамм глюкозы на 1 л раствора; Лурия в своем «бульоне L» 1957 года в точности скопировал оригинальный рецепт Бертани. [6] Рецепты, опубликованные позже, обычно не включали глюкозу.
Формулы [ править ]
Составы обычно различаются по количеству хлорида натрия, что обеспечивает выбор подходящих осмотических условий для конкретного бактериального штамма и желаемых условий культивирования. Композиции с низким содержанием соли, Lennox и Luria, идеально подходят для культур, требующих чувствительных к соли антибиотиков.
- LB-Miller (10 г / л NaCl)
- LB-Lennox (5 г / л NaCl)
- LB-Лурия (0,5 г / л NaCl)
Подготовка [ править ]
Ниже приводится распространенный метод приготовления 1 литра LB:
- Измерьте следующее:
- 10 г триптона
- 5 г дрожжевого экстракта
- 10 г NaCl
- Развести твердые частицы в ~ 800 мл дистиллированной или деионизированной воды.
- Добавьте еще дистиллированную или деионизированную воду в мерный цилиндр для обеспечения точности, чтобы получилось 1 литр.
- Автоклав при 121 ° C в течение 20 минут.
- После охлаждения встряхните колбу, чтобы гарантировать перемешивание, и LB готов к использованию.
Регулировка pH [ править ]
В этом разделе не процитировать любые источники . Февраль 2009 г. ) ( Узнайте, как и когда удалить этот шаблон сообщения ) ( |
Перед автоклавированием некоторые лаборатории регулируют pH LB до 7,5 или 8 с помощью гидроксида натрия. Однако гидроксид натрия не обеспечивает буферной способности среды, и это приводит к быстрым изменениям pH во время культивирования бактерий. Чтобы обойти это, некоторые лаборатории предпочитают регулировать pH с помощью 5-10 ммоль / л ТРИС- буфера, разбавленного из 1 моль / л исходного раствора ТРИС при желаемом pH. Однако в большинстве случаев регулировка pH не является обязательной. Некоторые лаборатории устанавливают pH до 7,0 просто в качестве меры предосторожности.
Поскольку буферизация с помощью TRIS также будет в значительной степени неэффективной в условиях значительного роста бактерий, регулирование pH LB таким особым образом обычно не требуется. Таким образом, использование ТРИС в некоторых рецептах бульонов (особенно когда культура будет храниться при комнатной температуре в течение длительных периодов времени) может считаться суеверной процедурой, не имеющей особой научной ценности.
См. Также [ править ]
- Пластина с агаром
- Сальвадор Лурия
- Среда SOC свой - широко используется среда дл культуры кишечной палочки в молекулярной биологии работы
Ссылки [ править ]
- ^ a b Бертани, Г. (2004). «Лизогения в середине двадцатого века: P1, P2 и другие экспериментальные системы» . Журнал бактериологии . 186 (3): 595–600. DOI : 10.1128 / JB.186.3.595-600.2004 . PMC 321500 . PMID 14729683 .
- ^ Бертани, G (1951). «Исследования по лизогенезу. I. Способ высвобождения фага лизогенными Escherichia coli» . J. Bacteriol . 62 (3): 293–300. PMC 386127 . PMID 14888646 .
- Перейти ↑ Miller, JH (1972). Эксперименты по молекулярной генетике. Лаборатория Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк.
- ^ Лурия, ЮВ; Адамс, Дж. Н.; Тинг, Р. К. (1960). «Трансдукция способности использовать лактозу среди штаммов E. coli и S. dysenteriae и свойства трансдуцирующих фаговых частиц». Вирусология . 12 (3): 348–390. DOI : 10.1016 / 0042-6822 (60) 90161-6 . PMID 13764402 .
- ^ Леннокс, ES (1955). «Трансдукция связанных генетических признаков хозяина бактериофагом P1». Вирусология . 1 (2): 190–206. DOI : 10.1016 / 0042-6822 (55) 90016-7 . PMID 13267987 .
- ^ a b Лурия, ЮВ; Берроуз, JW (1957). «Гибридизация Escherichia coli и Shigella» . J. Bacteriol . 74 (4): 461–476. PMC 289941 . PMID 13475269 .
- ^ Андерсон, EH (1946). «Потребность в росте устойчивых к вирусу мутантов штамма B Escherichia coli» . Proc. Natl. Акад. Sci. США . 32 (5): 120–128. DOI : 10.1073 / pnas.32.5.120 . PMC 1078898 . PMID 16588724 .
- ^ Sambrook, J., EF Fritsch и T. Maniatis. (1989). Молекулярное клонирование: лабораторное руководство, 2-е издание. Лаборатория Колд-Спринг-Харбор, Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк.
- ^ Никайдо, H. (2009). Ограничения LB Medium. Обдумывание мелких вещей - блог Microbe. КАК М. http://schaechter.asmblog.org/schaechter/2009/11/the-limitations-of-lb-medium.html