Индол тест представляет собой биохимический анализ проводили на бактериальных видов , чтобы определить способность организма превращать триптофан в индол . Это деление осуществляется цепочкой различных внутриклеточных ферментов , системой, обычно называемой «триптофаназой».
Биохимия [ править ]
Индол образуется путем восстановительного дезаминирования из триптофана через промежуточную молекулу индолпировиноградную кислоту. Триптофаназа катализирует реакцию дезаминирования, во время которой удаляется аминогруппа (-NH 2 ) молекулы триптофана. Конечными продуктами реакции являются индол, пировиноградная кислота , аммоний (NH 4 + ) и энергия. Пиридоксальфосфат необходим как кофермент .
Выполнение теста [ править ]
Как и во многих биохимических тестах на бактерии, результаты теста на индол обозначаются изменением цвета после реакции с добавленным реагентом.
Перед проведением теста чистую бактериальную культуру необходимо выращивать в стерильном триптофановом или пептонном бульоне в течение 24–48 часов. После инкубации в культуральный бульон добавляют пять капель реагента Ковача ( изоамиловый спирт , пара-диметиламинобензальдегид , концентрированная соляная кислота ).
О положительном результате свидетельствует наличие красного или красно-фиолетового цвета в поверхностном спиртовом слое бульона. Отрицательный результат отображается желтым цветом. Также может возникать переменный результат, в результате чего отображается оранжевый цвет. Это связано с присутствием скатола , также известного как метилиндол или метилированный индол, еще одного возможного продукта разложения триптофана.
Положительный красный цвет образуется в результате ряда реакций. Пара-диметиламинобензальдегид реагирует с присутствующим в среде индолом с образованием красного розиндольного красителя. Изоамиловый спирт образует комплекс с розиндольным красителем, который вызывает его осаждение . Оставшийся спирт и осадок затем поднимаются на поверхность среды.
Вариант этого теста с использованием реактива Эрлиха (с использованием этилового спирта вместо изоамилового спирта, разработанного Полом Эрлихом ) используется при выполнении теста на неферментерах и анаэробах .
Индол-положительные бактерии [ править ]
Бактерии, которые показали положительный результат на расщепление индола от триптофана, включают: Aeromonas hydrophila , Aeromonas punctata , Bacillus alvei , Edwardsiella sp., Escherichia coli , Flavobacterium sp., Haemophilus influenzae , Klebsiella oxytoca , Proteus sp. (не П. Mirabilis и П. penneri ), Plesiomonas shigelloides , Pasteurella multocida , Pasteurella pneumotropica , Enterococcus фекальный , Vibrio зр., иLactobacillus reuteri .
Индол-отрицательные бактерии [ править ]
Бактерии, которые дают отрицательные результаты индольного теста, включают: Actinobacillus spp., Aeromonas salmonicida , Alcaligenes sp., Большинство Bacillus sp., Bordetella sp., Enterobacter sp., Большинство Haemophilus sp., Большинство Klebsiella sp., Neisseria sp., Mannheimia. haemolytica , Pasteurella ureae , Proteus mirabilis , P. penneri , Pseudomonas sp., Salmonella sp., Serratia sp., Yersinia sp. иRhizobium sp.
Индоловый тест - один из четырех тестов серии IMViC , которые проверяют наличие кишечных бактерий. Три других теста включают: тест с метиловым красным [M], тест Фогеса – Проскауэра [V] и цитратный тест [C]. [1]
Ссылки [ править ]
- ^ Бачун, Дэйв С. и Венди А. Дастман. Руководство лаборатории микробиологии. Эд. Майкл Странц. Мейсон, Огайо: Cengage Learning, 2008. Упражнение 15, Печать «Нормальная флора кишечного тракта».
- Макфаддин, Жан Ф. «Биохимические тесты для идентификации медицинских бактерий». Уильямс и Уилкинс, 1980, стр 173 - 183.
- Пример типичных индольных реакций
- Angen, O .; Mutters, R .; Caugant, DA; Olsen, JE; Бисгаард, М. (1999). «Таксономические отношения комплекса [Pasteurella] haemolytica, оцененные с помощью гибридизации ДНК-ДНК и секвенирования 16S рРНК с предложением Mannheimia haemolytica gen. Nov., Comb, nov., Mannheimia granulomatis comb. Nov., Mannheimia glucosida sp. Nov., Mannheimia ruminalis sp. Nov. И Mannheimia varigena sp. Nov. ". Международный журнал систематической бактериологии. 49 (1): 67–86. DOI : 10.1099 / 00207713-49-1-67 . ISSN 0020-7713 . PMID 10028248
