Чашка с агаром - это чашка Петри , содержащая питательную среду, отвержденную агаром , используемую для культивирования микроорганизмов . Иногда для воздействия на рост добавляют селективные соединения, например антибиотики . [1]
Использует | Микробиологическая культура Искусство |
---|---|
Похожие материалы | Чашка Петри Среда для выращивания |
Отдельные микроорганизмы, помещенные на чашку, вырастут в отдельные колонии , каждая из которых является клоном, генетически идентичным отдельному организму-предку (за исключением низкой неизбежной скорости мутаций ). Таким образом, планшет можно использовать либо для оценки концентрации организмов в жидкой культуре, либо для подходящего разведения этой культуры с использованием счетчика колоний , либо для создания генетически чистых культур из смешанной культуры генетически различных организмов.
Доступны несколько методов для нанесения пластин на клетки. Один из методов известен как « полосы ». В этом методе капля культуры на конце тонкой стерильной петли проволоки, иногда известной как инокулятор, наносится на поверхность агара, оставляя организмы позади, большее число в начале полосы и меньшее число в конце. В какой-то момент во время успешной «полоски» количество депонированных организмов будет таким, что отдельные отдельные колонии будут расти в этой области, которую можно удалить для дальнейшего культивирования с использованием другой стерильной петли. Крайне важно работать в стерильных условиях, чтобы не допустить загрязнения чашек. [1]
Другой способ высеивания организмов на чашки с агаром - это точечный анализ . Этот тип анализа часто используется для проверки жизнеспособности клеток и выполняется с помощью пиннеров (часто также называемых лягушками). Третий используемый метод - использование стерильных стеклянных шариков для высева клеток. В этом методе клетки выращивают в жидкой культуре, небольшой объем которой наносится пипеткой на чашку с агаром, а затем распределяется вместе с шариками. Посев реплик - это еще один метод, позволяющий высеять клетки на чашки с агаром. Эти четыре метода являются наиболее распространенными, но возможны и другие. Крайне важно работать в стерильных условиях, чтобы предотвратить загрязнение чашек с агаром. Таким образом, покрытие часто выполняется в шкафу с ламинарным потоком или на рабочем столе рядом с горелкой Бунзена . [2]
История
В 1881 году Фанни Хессе , работавшая техником у своего мужа Вальтера Гессе в лаборатории Роберта Коха , предложила агар в качестве эффективного закрепляющего агента, поскольку он некоторое время был обычным явлением при приготовлении джема. [3]
Типы
Как и другие питательные среды , составы агара, используемые в чашках, можно классифицировать как «определенные» или «неопределенные»; определенная среда синтезируется из отдельных химических веществ, необходимых организму, поэтому точный молекулярный состав известен, в то время как неопределенная среда изготавливается из натуральных продуктов, таких как дрожжевой экстракт , где точный состав неизвестен. [4]
Чашки с агаром могут быть сформулированы как разрешающие, с целью обеспечения роста любых присутствующих организмов, так и ограничительные или селективные, с целью обеспечения роста только определенной подгруппы этих организмов. [5] Это может принимать форму потребности в питании, например, предоставление определенного соединения, такого как лактоза, в качестве единственного источника углерода и, таким образом, выбора только организмов, которые могут метаболизировать это соединение, или путем включения определенного антибиотика или другого вещества для выбора только организмы, устойчивые к этому веществу. Это до некоторой степени коррелирует с определенными и неопределенными медиа; Неопределенные среды, изготовленные из натуральных продуктов и содержащие неизвестную комбинацию очень многих органических молекул, обычно более терпимы с точки зрения удовлетворения потребностей более широкого круга организмов, в то время как определенные среды могут быть точно адаптированы для отбора организмов с конкретными свойствами.
Чашки с агаром также могут быть индикаторными чашками, в которых организмы не отбираются на основе роста, а вместо этого отличаются изменением цвета в некоторых колониях, обычно вызванным действием фермента на какое-либо соединение, добавленное в среду. [6]
Чашки инкубируют от 12 часов до нескольких дней в зависимости от выполняемого теста.
Некоторые часто используемые типы чашек с агаром:
Кровяной агар
Пластина с кровяным агаром
Чашки с кровяным агаром (БАТ) содержат кровь млекопитающих (обычно овец или лошадей), обычно в концентрации 5–10%. BAP - это обогащенные дифференциальные среды, используемые для выделения требовательных организмов и определения гемолитической активности. β-Гемолитическая активность показывает лизис и полное переваривание содержимого красных кровяных телец, окружающих колонию. Примеры включают Streptococcus haemolyticus . α-Гемолиз вызывает только частичный лизис эритроцитов (клеточная мембрана остается неповрежденной) и приобретает зеленый или коричневый цвет из-за превращения гемоглобина в метгемоглобин. Примером этого может быть Streptococcus viridans . γ-Гемолиз (или негемолитический) - это термин, относящийся к отсутствию гемолитической активности. [7] БАТ также содержат мясной экстракт , триптон , хлорид натрия и агар.
Шоколадный агар
Шоколадный агар - это пластина с кровяным агаром, в которой клетки крови лизируются путем нагревания клеток до 56 ° C. Он используется для выращивания привередливых респираторных бактерий, таких как Haemophilus influenzae . На самом деле в тарелке нет шоколада ; он назван только по окраске.
Агар с конской кровью
Агар с конской кровью - это разновидность обогащенной кровью микробиологической питательной среды. Поскольку он обогащен, он способствует росту некоторых привередливых бактерий и позволяет определять гемолитическую активность этих бактериальных культур.
Агар Тайера-Мартина
Агар Тайера-Мартина - это шоколадный агар, предназначенный для выделения Neisseria gonorrhoeae .
Тиосульфат-цитрат-желчные соли-сахарозный агар
Агар тиосульфат-цитрат-желчные соли-сахароза усиливает рост Vibrio spp. , включая холерный вибрион . [8]
Общие бактериальные среды
- Желчь эскулин агар используется для выделения Enterococcus и группы D Streptococcus видов
- CLED-агар - агар с дефицитом цистеина , лактозы и электролитов используется для выделения и дифференциации бактерий мочевыводящих путей, поскольку он подавляет скопление видов Proteus и может различать ферментеры лактозы и неферментеры.
- Среда Гранада используется для выделения и дифференциации Streptococcus группы B , Streptococcus agalactiae из клинических образцов. Он растет в среде Гранады, поскольку красные колонии и большинство сопутствующих бактерий подавляются.
- Кишечный агар Hektoen предназначен для выделения и восстановления фекальных бактерий семейства Enterobacteriaceae . Это особенно полезно при изоляции сальмонелл и шигелл .
- Бульон лизогении
- Агар МакКонки - это селективная и дифференциальная среда, используемая для дифференциации грамотрицательных бактерий при подавлении роста грамположительных бактерий. Добавление солей желчных кислот и кристаллического фиолетового к агару подавляет рост большинства грамположительных бактерий, что делает агар МакКонки селективным. Лактоза и нейтральный красный добавляют, чтобы отличить ферментеры лактозы, которые образуют розовые колонии, от неферментеров лактозы, которые образуют прозрачные колонии. Альтернативная среда, эозин-метиленовый синий, служит аналогичной цели.
- Солевой агар с маннитом также является селективной и дифференциальной средой. Маннит указывает организмы, брожение маннит: маннит брожения производит молочную кислоту , снижение рН и поворачивая пластину желтого цвета. Соль выбрать для галофилов ; организмы, которые не могут противостоять высокому содержанию соли, не могут хорошо расти.
- Агар Мюллера-Хинтона содержит говяжий настой, пептон и крахмал и используется в основном для тестирования чувствительности к антибиотикам. Это может быть кровяной агар .
- Питательный агар обычно используется для выращивания неприхотливых организмов и наблюдения за производством пигментов. Его безопасно использовать в школьных научных лабораториях, поскольку он не способствует избирательному росту болезнетворных бактерий.
- Агар Онеза позволяет проводить более быструю бактериологическую диагностику, поскольку колонии Salmonella и Shigella можно четко и надежно отличить от других Enterobacteriaceae. Урожайность Salmonella в образцах стула, полученных при использовании этой среды, выше, чем при использовании агара LEIFSON или агара Salmonella – Shigella .
- Агар с фенилэтиловым спиртом выбирает виды стафилококков , подавляя при этом грамотрицательные бактерии (например, Escherichia coli , Shigella , Proteus и т. Д.).
- Агар R2A, неспецифическая среда, имитирующая воду, поэтому используется для анализа воды.
- Триптический (триптиказный) соевый агар (TSA) - это среда общего назначения, получаемая путем ферментативного переваривания соевого шрота и казеина . Часто это основная среда для других типов агара; например, чашки с кровяным агаром получают путем обогащения чашек TSA кровью. Чашки TSA поддерживают рост многих полужадных бактерий, включая некоторые виды Brucella , Corynebacterium , Listeria , Neisseria и Vibrio .
- Ксилоза - лизин - дезоксихолат использует агар для культуры стула образцов и содержит два индикатора. Он разработан для подавления грамположительных бактерий, при этом стимулируется рост грамотрицательных бацилл . Колонии ферментеров лактозы кажутся желтыми. Он также используется для культивирования возможных сальмонелл, которые могут присутствовать в образце пищи. Большинство колоний сальмонелл имеют на себе черный центр.
- Цетримидный агар используется для селективного выделения грамотрицательных бактерий Pseudomonas aeruginosa .
- Агар Тинсдейла содержит теллурит калия , который может изолировать коринебактерии дифтерии . [8]
Грибковые среды
- Агар Сабуро используется для культивирования грибов и имеет низкий pH, что подавляет рост большинства бактерий; он также содержит антибиотик гентамицин, специфически подавляющий рост грамотрицательных бактерий.
- Агар для настаивания сена специфичен для культивирования слизистой плесени (которая не является грибком).
- Картофельный агар с декстрозой используется для культивирования некоторых видов грибов.
- Агар с солодовым экстрактом имеет высокое содержание пептона и является кислым. Он в основном используется для изоляции грибковых микроорганизмов.
Моховые СМИ
- Кноп агар используют для аксенического культивирования протонемы и целых растений мха , таких как Physcomitrella patens , модельного организма . [9]
Дрожжевые среды
- Среда YEPD часто используется в качестве общей среды для роста дрожжей, таких как Saccharomyces cerevisiae и Candida albicans.
- Среда для споруляции используется, когда должны образоваться споры. Его также можно использовать при работе с грибами или бактериями, в зависимости от того, способен ли штамм образовывать споры.
Мега тарелка
- Чашка Петри размером 2 'x 4', заполненная 14 л (литрами) агаровой среды, полученной из морских водорослей, созданная учеными из Гарварда, которая использовалась, чтобы увидеть, как кишечная палочка стала устойчивой к антибиотикам. Мега-тарелка также помогла изучить более уникальные концепции микробиологии, такие как параллельная эволюция, мутационный отбор, колониальное вмешательство и т. Д. [10]
Смотрите также
- Микробное искусство
- Вирусный налет
Различные специфические типы агара:
- Казеиновый питательный агар
- MRS агар
- Нью-йоркский агар
Рекомендации
- ^ a b Мэдиган М., Мартинко Дж., ред. (2005). Брок Биология микроорганизмов (11-е изд.). Прентис Холл. ISBN 0-13-144329-1.
- ^ Сандерс, Эрин Р. (11 мая 2012 г.). «Асептические лабораторные методы: методы покрытия» . Журнал визуализированных экспериментов (63): e3064. DOI : 10.3791 / 3064 . PMC 4846335 . PMID 22617405 . Архивировано 14 ноября 2017 года . Дата обращения 3 мая 2018 .
- ^ «История чашки с агаром» . Новости лаборатории . Архивировано из оригинального 11 февраля 2010 года . Проверено 22 февраля 2010 .
- ^ Барон С; и др., ред. (1996). Медицинская микробиология Барона (4-е изд.). Медицинский филиал Техасского университета. ISBN 0-9631172-1-1. (через книжную полку NCBI) .
- ^ Райан К.Дж.; Рэй CG, ред. (2004). Шеррис Медицинская микробиология (4-е изд.). Макгроу Хилл. ISBN 0-8385-8529-9.
- ^ «Индикаторные таблички» . Проверено 12 июля 2018 .
- ^ «Чашки с кровяным агаром и протоколы гемолиза» . Архивировано из оригинала на 2012-02-02 . Проверено 28 октября 2014 .
- ^ а б Фишер, Брюс; Харви, Ричард П .; Чамп, Памела С. (2007). Иллюстрированные обзоры Липпинкотта: микробиология (серия иллюстрированных обзоров Липпинкотта) . Хагерствон, доктор медицины: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс. ISBN 978-0-7817-8215-9.
- ^ Рески, Ральф ; Абель, Вольфганг О. (1985). «Индукция бутонизации на хлоронемах и стеблях мха Physcomitrella patens с использованием изопентениладенина» . Planta . 165 (3): 354–358. DOI : 10.1007 / bf00392232 . PMID 24241140 . S2CID 11363119 .
- ^ «Кинематографический подход к лекарственной устойчивости» . Harvard Gazette . 2016-09-08 . Проверено 8 апреля 2021 .
Внешние ссылки
- Видео приготовления агара с овечьей кровью
- Друзья науки - Все об агаре
- Видео о методах асептического покрытия
- Видео о том, как использовать стеклянные бусины для расклейки образцов