Тест Кумбса , также известный как тест на антиглобулин ( AGT ), представляет собой один из двух анализов крови, используемых в иммуногематологии . Это прямой и косвенный тесты Кумбса. Прямой тест Кумбса обнаруживает антитела, прилипшие к поверхности красных кровяных телец. [1] Поскольку эти антитела иногда разрушают эритроциты, человек может страдать анемией, и этот тест может помочь прояснить состояние. Непрямой Кумбс обнаруживает антитела, которые свободно плавают в крови. [1] Эти антитела могут действовать против определенных эритроцитов, и тест может быть проведен для диагностики реакции на переливание крови . [1]
Тест Кумбса | |
---|---|
MeSH | D003298 |
MedlinePlus | 003344 |
Прямой тест Кумбса используется для проверки на аутоиммунную гемолитическую анемию, то есть состояние, при котором иммунная система разрушает эритроциты , что приводит к анемии . Прямой тест Кумбса используется для обнаружения антител или белков комплемента, прикрепленных к поверхности эритроцитов. Для проведения теста берут образец крови и промывают эритроциты (удаляя собственную плазму пациента и несвязанные антитела из эритроцитов), а затем инкубируют с античеловеческим глобулином («реагент Кумбса»). Если затем эритроциты агглютинируют , прямой тест Кумбса дает положительный результат, что является визуальным признаком того, что антитела или белки комплемента связаны с поверхностью эритроцитов и могут вызывать разрушение этих клеток.
Непрямой тест Кумбса используется при пренатальном тестировании беременных женщин и при тестировании перед переливанием крови. Тест обнаруживает антитела против чужеродных эритроцитов. В этом случае сыворотка извлекается из образца крови, взятого у пациента. Сыворотка инкубируется с чужеродными эритроцитами известной антигенности . Наконец, добавляется античеловеческий глобулин. Если происходит агглютинация, непрямой тест Кумбса положительный. [2]
Механизм
Два теста Кумбса основаны на связывании античеловеческих антител с человеческими антителами, обычно IgG или IgM . Эти антитела против человека продуцируются плазматическими клетками животных, кроме человека, после иммунизации их плазмой человека . Кроме того, эти антитела против человека будут также связываться с антителами человека, которые могут фиксироваться на антигенах на поверхности эритроцитов (RBC). В соответствующих условиях пробирки это может привести к агглютинации эритроцитов и позволит визуализировать образующиеся скопления эритроцитов. Если наблюдается комкование, тест Кумбса положительный; в противном случае тест Кумбса отрицательный. [ необходима цитата ]
Общие клинические применения теста Кумбса включают подготовку крови для переливания в кроссе-согласовании , атипичный антитела в плазме крови из беременных женщин в рамках дородовой помощи , и обнаружение антител для диагностики иммунных опосредованного гемолитических анемий . [ необходима цитата ]
Тесты Кумбса выполняются с использованием эритроцитов или сыворотки (прямой или косвенной, соответственно) из образцов венозной цельной крови, взятых у пациентов путем венепункции . Венозная кровь отправляется в лабораторию (или банк крови), где обученный научно-технический персонал проводит тесты Кумбса. Клиническое значение результата оценивает врач , запросивший тест Кумбса, возможно, с помощью лабораторного гематолога .
Прямой тест Кумбса
Прямой тест Кумбса, также называемый прямым тестом на антиглобулин (DAT), используется для определения того , связаны ли антитела или факторы системы комплемента с поверхностными антигенами эритроцитов in vivo . [3] DAT в настоящее время не требуется для тестирования перед переливанием крови, но может быть включен некоторыми лабораториями. [ требуется медицинская ссылка ] [ требуется разъяснение ] Пациенты перед переливанием крови часто проходят непрямой тест Кумбса.
Использует
Прямой тест Кумбса используется в клинической практике при подозрении на иммуноопосредованную гемолитическую анемию (опосредованное антителами разрушение эритроцитов). Положительный тест Кумбса указывает на то, что иммунный механизм атакует эритроциты пациента . Этот механизм может быть аутоиммунным , аллоиммунным или иммуноопосредованным механизмом, индуцированным лекарствами. [ необходима цитата ]
Примеры аллоиммунного гемолиза
- Гемолитическая болезнь новорожденного (также известная как HDN или эритробластоз плода)
- Резус-D гемолитическая болезнь новорожденных (также известная как резус-болезнь)
- Гемолитическая болезнь АВО новорожденных (прямая проба Кумбса может быть только слабо положительной)
- Анти-Келлская гемолитическая болезнь новорожденных
- Резус-гемолитическая болезнь новорожденных
- Гемолитическая болезнь новорожденных по резус-E
- Несовместимость других групп крови (RhC, Rhe, Kidd, Duffy, Lewis, MN, P и другие)
- Аллоиммунные гемолитические трансфузионные реакции
Примеры аутоиммунного гемолиза / иммуно-гемолитического гемолиза
- Аутоиммунная гемолитическая анемия с тепловыми антителами
- Идиопатический
- Системная красная волчанка
- Синдром Эванса (антитромбоцитарные антитела и гемолитические антитела)
- Иммуно-гемолитическая анемия с использованием холодовых антител
- Идиопатический синдром холодового гемагглютинина
- Макроглобулинемия Вальденстрема
- Инфекционный мононуклеоз
- Пароксизмальная холодовая гемоглобинурия (редко)
Иммуноопосредованный гемолиз, индуцированный лекарствами
- Метилдопа (IgG-опосредованная гиперчувствительность II типа)
- Пенициллин (высокая доза)
- Хинидин (IgM-опосредованная активация классического пути комплемента и комплекса мембранной атаки, MAC)
(Устройство памяти для запоминания, что DAT проверяет эритроциты и используется для проверки младенцев на гемолитическую болезнь новорожденных : R h D isease ; R = RBCs, D = DAT.)
Лаборатория
Эритроциты пациента промывают (удаляя собственную сыворотку пациента ), а затем центрифугируют с античеловеческим глобулином (также известным как реагент Кумбса). Если иммуноглобулин или факторы комплемента были зафиксированы на поверхности эритроцитов in vitro , античеловеческий глобулин будет агглютинировать эритроциты, и прямой тест Кумбса будет положительным. (Визуальное представление положительного прямого теста Кумбса показано в верхней половине схемы).
Косвенный тест Кумбса
Непрямой тест Кумбса, также называемый непрямым тестом на антиглобулин (IAT), используется для выявления реакций антитело-антиген in vitro . Он используется для обнаружения очень низких концентраций антител в плазме / сыворотке пациента перед переливанием крови. В дородовой помощи IAT используется для скрининга беременных женщин на антитела, которые могут вызвать гемолитическую болезнь новорожденных . IAT также можно использовать для тестирования совместимости , идентификации антител, фенотипирования эритроцитов и исследований титрования.
Использует
Подготовка к переливанию крови
Непрямой тест Кумбса используется для скрининга антител при подготовке крови к переливанию крови . Кровь донора и реципиента должна быть совместима с ABO и Rh D. Донорская кровь для переливания также проверяется на инфекции в отдельных процессах.
- Скрининг антител
Образец крови реципиента и образец крови каждой единицы донорской крови проверяются на антитела с помощью непрямого теста Кумбса. Каждый образец инкубируется с широким спектром эритроцитов, которые вместе демонстрируют полный спектр поверхностных антигенов (т. Е. Группы крови ).
- Перекрестное соответствие
Непрямой тест Кумбса используется для тестирования образца сыворотки реципиента на наличие антител против образца эритроцитов донора крови . Иногда это называют перекрестным сопоставлением крови.
Антенатальный скрининг антител
Непрямой тест Кумбса используется для выявления у беременных женщин антител IgG , которые могут проходить через плаценту в кровь плода и вызывать гемолитическую болезнь новорожденных .
Лабораторный метод
IAT - это двухэтапный тест. (Перекрестное соответствие показано визуально в нижней половине схемы в качестве примера непрямого теста Кумбса).
Первая ступень
Промытые эритроциты (эритроциты) с известными антигенами инкубируют с сывороткой пациента, содержащей неизвестное содержание антител. Если сыворотка содержит антитела к антигенам на поверхности эритроцитов, антитела будут связываться с поверхностью эритроцитов.
Вторая стадия
Эритроциты промывают три или четыре раза изотоническим физиологическим раствором, а затем инкубируют с антиглобулином человека. Если антитела связались с поверхностными антигенами эритроцитов на первом этапе, эритроциты будут агглютинировать при инкубации с глобулином против человека (также известным реагентом Кумбса) на этом этапе, и непрямой тест Кумбса будет положительным.
Титрования
Разбавив сыворотку, содержащую антитела, можно определить количество антитела в сыворотке. Это достигается путем использования удвоенных разведений сыворотки и определения максимального разведения исследуемой сыворотки, способного вызвать агглютинацию соответствующих эритроцитов.
Реагент Кумбса
Реагент Кумбса (также известный как антиглобулин Кумбса или античеловеческий глобулин ) используется как в прямом, так и в непрямом тесте Кумбса. Реагент Кумбса - античеловеческий глобулин . Его получают путем инъекции человеческого глобулина животным, которые вырабатывают поликлональные антитела, специфичные для человеческих иммуноглобулинов и факторов системы комплемента человека. Можно использовать более специфические реагенты Кумбса или моноклональные антитела .
Средства улучшения
Оба IgM и IgG антитела прочно связываются с их комплементарными антигенами. Антитела IgG наиболее реактивны при 37 ° C. Антитела IgM легко обнаруживаются в физиологическом растворе при комнатной температуре, поскольку антитела IgM способны соединяться между эритроцитами из-за своего большого размера, эффективно создавая то, что называется агглютинацией . Антитела IgG меньше по размеру и требуют помощи для достаточно хорошего мостика, чтобы образовалась зрительная реакция агглютинации . Реагенты, используемые для усиления обнаружения IgG, называются потенциаторами. У эритроцитов есть чистый отрицательный заряд, называемый дзета-потенциалом, который заставляет их естественным образом отталкиваться друг от друга. Потенциаторы снижают дзета-потенциал мембран эритроцитов. Общие потенциаторы включают раствор с низкой ионной силой (LISS), альбумин , полиэтиленгликоль (PEG) и протеолитические ферменты .
История
Тест Кумбса был впервые описан в 1945 году кембриджскими иммунологами Робином Кумбсом (в честь которого он назван), Артуром Мурантом и Робом Рэйсом . [5] Исторически это делалось в пробирках . Сегодня это обычно делается с использованием микрочипов и гелевых технологий.
Популярная культура
В книге Артура Хейли 1959 года «Последний диагноз» жена сотрудника больницы беременна; у нее отрицательный резус-фактор, а у него положительный резус-фактор. Он упоминает об этом и рекомендует провести непрямой тест Кумбса новому помощнику патологоанатома, который предполагает, что это очевидно, и даже подписывает форму заявки, чтобы заказать сыворотку Кумбса. Из-за чрезмерной скупости главного патолога он отвергает решение другого врача заказать сыворотку Кумбса и отказывается проводить непрямой тест Кумбса, вместо этого решая, что одних тестов на белок и физиологический раствор достаточно. Это решение приводит к трагическим последствиям. Эту историю рассказывает экранизация романа «Молодые врачи» 1961 года, но со счастливым концом.
Рекомендации
- ^ a b c «Тест Кумбса: Медицинская энциклопедия MedlinePlus» . medlineplus.gov . Проверено 6 мая 2019 .
- ^ Ф. Розен и Р. Геха, Тематические исследования в иммунологии, 4-е изд. , Наука о гирляндах, стр.173.
- ^ Рейд М.Э., Ломас-Фрэнсис К. (23 декабря 2015 г.). «Глава 136: Антигены и антитела к эритроцитам». Гематология Вильямса (9-е изд.). Нью-Йорк: Макгроу-Хилл. ISBN 9780071833004. OCLC 913870019 .
- ^ Джо Чаффин (27.02.2017). «028: Кто ДАТ? Со Сью Джонсон» .Цитирование: C Feldman & J O'Connor. | author = Микаэль Хэггстрём
- ^ Кумбс, RR; Mourant, AE; Гонка, РР (1945). «Новый тест для выявления слабых и неполных резус-агглютининов» . Британский журнал экспериментальной патологии . 26 : 255–66. PMC 2065689 . PMID 21006651 .
Внешние ссылки
- Тестирование Кумбса - Институт трансфузиологии.
- Тест Кумбса - прямой - Medlineplus.org.
- Тест Кумбса - непрямой - Medlineplus.org.
- Острая анемия - emedicine.com
- Лекарства, вызывающие гемолитическую анемию - Руководство Merck.
- Тест Кумбса по медицинским предметным рубрикам Национальной медицинской библиотеки США (MeSH)