Нильский синий (или Нильский синий А ) - краситель, используемый в биологии и гистологии . Он может использоваться с живыми или фиксированными клетками и придает синий цвет ядрам клеток .
Имена | |
---|---|
Название ИЮПАК [9- (диэтиламино) бензо [ a ] феноксазин-5-илиден] азана сульфат | |
Другие названия Нильский синий A, сульфат нильского синего | |
Идентификаторы | |
| |
3D модель ( JSmol ) | |
ЧЭМБЛ | |
ChemSpider | |
ECHA InfoCard | 100.020.757 |
PubChem CID | |
| |
| |
Характеристики | |
C 20 H 20 ClN 3 O | |
Молярная масса | 353,845 г / моль |
Если не указано иное, данные приведены для материалов в их стандартном состоянии (при 25 ° C [77 ° F], 100 кПа). | |
проверить ( что есть ?) | |
Ссылки на инфобоксы | |
Его также можно использовать в сочетании с флуоресцентной микроскопией для окрашивания на наличие гранул полигидроксибутирата в прокариотических или эукариотических клетках. Кипячение раствора нильского синего с серной кислотой дает нильский красный (оксазон нильского синего).
Химические и физические свойства
Нильский синий - флуоресцентный краситель . В флуоресценции показывает , особенно в неполярных растворителях с высоким квантовым выходом . [1]
Поглощения и излучения максимумы синего Нила сильно зависит от рН и используются растворители: [1]
Растворитель | Поглощение λ max (нм) | Эмиссия λ max (нм) |
---|---|---|
Толуол | 493 | 574 |
Ацетон | 499 | 596 |
Диметилформамид | 504 | 598 |
Хлороформ | 624 | 647 |
1-бутанол | 627 | 664 |
2-пропанол | 627 | 665 |
Спирт этиловый | 628 | 667 |
Метанол | 626 | 668 |
Воды | 635 | 674 |
1,0 М соляная кислота (pH = 1,0) | 457 | 556 |
0,1 М раствор гидроксида натрия (pH = 11,0) | 522 | 668 |
Аммиачная вода (pH = 13,0) | 524 | 668 |
Длительность флуоресценции нильского голубого в этаноле составила 1,42 нс. Это меньше, чем соответствующее значение нильского красного - 3,65 нс. Продолжительность флуоресценции не зависит от разведения в диапазоне от 10 -3 до 10 -8 моль / л. [1]
Окрашивание нильским синим
Нильский синий используется для гистологического окрашивания биологических препаратов. Он подчеркивает различие между нейтральными липидами ( триглицериды , сложные эфиры холестерина , стероиды ), окрашенными в розовый цвет, и кислотами ( жирные кислоты , хромолипиды , фосфолипиды ), окрашенными в синий цвет. [2]
По словам Клееберга, для окрашивания нильским синим используются следующие химические вещества:
- Нил Блю А
- 1% уксусная кислота
- Глицерин или глицериновый желатин
Рабочий процесс
Образца или замороженные срезы является / являются фиксироваться в формальдегид , а затем погружают на 20 минут в растворе голубого Нила или 30 сек в нильского синего А (1% вес / объем в дистиллированной воде) и промывали водой. Для лучшей дифференциации его погружают в 1% уксусную кислоту на 10–20 минут или 30 секунд, пока цвета не станут чистыми. Это может занять всего 1-2 минуты. Затем образец тщательно промывают водой (от одного до двух часов). После этого окрашенный образец переносится на предметное стекло микроскопа и удаляется лишняя вода. Образец можно залить глицерином или глицериновым желатином .
Полученные результаты
Ненасыщенные глицериды - розового цвета, ядра и эластины - темного цвета, жирные кислоты и различные жирные вещества и жировые смеси - фиолетово-синего цвета. [3]
Пример: обнаружение гранул поли-β-гидроксибутирата (ПОБ)
Эти PHB гранулы в клетках Pseudomonas solanacearum можно визуализировать с помощью синего окрашивания Нила. Гранулы ПОБ в окрашенных мазках наблюдают с помощью эпифлуоресцентного микроскопа под масляной иммерсией при 1000- кратном увеличении; при длине волны возбуждения 450 нм они демонстрируют сильную оранжевую флуоресценцию. [4]
Нильский синий в электрофорезе ДНК
Нильский синий, по-видимому, также используется во множестве коммерческих составов для окрашивания ДНК, используемых для электрофореза ДНК . [5] Поскольку для визуализации в агарозном геле не требуется ультрафиолетовое просвечивание, как в случае с бромидом этидия , его можно использовать для наблюдения за ДНК по мере ее разделения, а также в качестве красителя для помощи в экстракции ДНК из геля. фрагменты, не повреждаемые УФ-излучением.
Нильский синий в онкологии
Производные Нил синего являются потенциальными фотосенсибилизаторами в фотодинамической терапии от злокачественных опухолей . Эти красители агрегируют в опухолевых клетках, особенно в липидных мембранах , и / или изолируются и концентрируются в субклеточных органеллах . [6]
С помощью производного нильского синего N- этил-нильского синего (EtNBA) нормальные и предраковые ткани в экспериментах на животных можно различить с помощью флуоресцентной спектроскопии при визуализации флуоресценции. EtNBA не проявляет фототоксических эффектов. [7]
Синтез
Нильский синий и родственные ему нафтоксазиниевые красители могут быть получены катализируемой кислотой конденсацией либо 5- (диалкиламино) -2-нитрозофенолов с 1-нафтиламином , 3- (диалкиламино) фенолов с N- алкилированными 4-нитрозо-1-нафтиламинами, либо N- алкилированными 4-нитрозо-1-нафтиламинами. , N- диалкил-1,4-фенилендиамины с 4- (диалкиламино) -1,2-нафтохинонами. В качестве альтернативы продукт катализируемой кислотой конденсации 4-нитрозо- N , N- диалкиланилина с 2-нафтолом (соль 9- (диалкиламино) бензо [ a ] феноксазин-7-ium) может быть окислен в присутствии амин, устанавливающий второй амино-заместитель в 5-м положении бензо [ a ] феноксазиниевой системы. [8] Следующая схема иллюстрирует первый из этих четырех подходов, ведущих к перхлорату нильского голубого:
Рекомендации
- ^ a b c Хосе, Джини; Берджесс, Кевин (2006). «Флуоресцентные красители на основе бензофеноксазина для мечения биомолекул» (PDF) . Тетраэдр . 62 (48): 11021. DOI : 10.1016 / j.tet.2006.08.056 .
- ^ Roche Lexikon, доступ к 25 июня 2007 .
- ^ Бенно Romeis, Mikroskopische Technik , 15. Aufl., Р. Ольденбург Verlag, München, 1948
- ^ 97/647 / EG: Entscheidung дер-ЕС Kommission ВОМ 9 сентября 1997 über Эйн vorläufiges Versuchsprogramm für диагностирует, Nachweis унд Identifizierung фон Pseudomonas solanacearum (Smith) Smith в Kartoffeln , доступ к 27 июня 2007 .
- ^ Протокол окрашивания ДНК в формате PDF для школ, Университет Рединга. Архивировано 4 марта 2012 г. в Wayback Machine.
- ^ Лин, CW; Шулок-младший; Кирли, SD; Cincotta, L; Фоли, JW (1991). «Лизосомная локализация и механизм захвата фотосенсибилизаторов нильского синего в опухолевых клетках». Исследования рака . 51 (10): 2710–9. PMID 2021950 .
- ^ Ван Ставерен, HJ; Спилман, О.К .; Witjes, MJ; Cincotta, L; Звезда, WM (2001). «Флуоресцентная визуализация и спектроскопия этилнилового синего на животных моделях (пред) злокачественных новообразований». Фотохимия и фотобиология . 73 (1): 32–8. DOI : 10,1562 / 0031-8655 (2001) 073 <0032: FIASOE> 2.0.CO; 2 . PMID 11202363 .
- ^ Каниц, Андреас; Хартманн, Хорст (1999). «Получение и характеристика мостиковых солей нафтоксазиния». Европейский журнал органической химии . 1999 (4): 923–930. DOI : 10.1002 / (SICI) 1099-0690 (199904) 1999: 4 <923 :: AID-EJOC923> 3.0.CO; 2-N .