Иммуногистохимия
Иммуногистохимия ( ИГХ ) является наиболее распространенным применением иммунного окрашивания . Он включает в себя процесс селективной идентификации антигенов (белков) в клетках среза ткани с использованием принципа связывания антител специфически с антигенами в биологических тканях . [1] IHC получил свое название от корней «иммуно» в отношении антител, используемых в процедуре, и «гисто», что означает ткань (сравните с иммуноцитохимией ). Альберт Кунс разработал и впервые применил эту процедуру в 1941 году. [2]
Визуализировать взаимодействие антитело-антиген можно несколькими способами, в основном одним из следующих:
Иммуногистохимическое окрашивание широко используется в диагностике аномальных клеток, таких как те, которые обнаруживаются в раковых опухолях. Специфические молекулярные маркеры характерны для конкретных клеточных событий, таких как пролиферация или гибель клеток ( апоптоз ). [4] Иммуногистохимия также широко используется в фундаментальных исследованиях для понимания распределения и локализации биомаркеров и дифференциально экспрессируемых белков в различных частях биологической ткани.
Подготовка образца имеет решающее значение для сохранения клеточной морфологии, тканевой архитектуры и антигенности эпитопов -мишеней . Это требует надлежащего сбора тканей, фиксации и секционирования. Для фиксации ткани часто используется раствор формалина , но могут использоваться и другие методы.
Затем ткань можно нарезать или использовать целиком, в зависимости от цели эксперимента или самой ткани. Перед разрезом образец ткани может быть помещен в среду, такую как парафин или криосреда. Срезы можно нарезать на различных инструментах, чаще всего на микротоме , криостате или вибратоме . Образцы обычно нарезают в диапазоне 3–5 мкм . [ править ] Затем срезы помещают на предметные стекла, обезвоживают с помощью промывки спиртом возрастающей концентрации (например, 50 %, 75 %, 90 %, 95 %, 100 %) и очищают с помощью детергента, такого как ксилол , перед визуализацией под микроскоп.
В зависимости от метода фиксации и сохранения ткани в образце могут потребоваться дополнительные шаги, чтобы сделать эпитопы доступными для связывания антител, включая депарафинизацию и извлечение антигена. Для тканей, фиксированных формалином и залитых парафином, часто требуется поиск антигена, который включает предварительную обработку срезов теплом или протеазой . [1] [5] Эти этапы могут иметь значение между окрашиванием или отсутствием окрашивания целевых антигенов.
