Из Википедии, свободной энциклопедии
  (Перенаправлено из сплайсинга генов )
Перейти к навигации Перейти к поиску
Конструирование рекомбинантной ДНК, в которой фрагмент чужеродной ДНК вставлен в плазмидный вектор. В этом примере ген, обозначенный белым цветом, инактивируется при вставке фрагмента чужеродной ДНК.
Часть серии по
Генная инженерия
Генная инженерия logo.png
 
Генетически модифицированные организмы
История и регулирование
Процесс
Приложения
Споры

Молекулы рекомбинантной ДНК ( рДНК ) - это молекулы ДНК , образованные лабораторными методами генетической рекомбинации (такими как молекулярное клонирование ), которые объединяют генетический материал из нескольких источников, создавая последовательности , которые иначе не были бы обнаружены в геноме .

Рекомбинантная ДНК - это общее название фрагмента ДНК, созданного путем объединения как минимум двух фрагментов из двух разных источников. Рекомбинантная ДНК возможна, потому что молекулы ДНК всех организмов имеют одинаковую химическую структуру и отличаются только нуклеотидной последовательностью в пределах этой идентичной общей структуры. Молекулы рекомбинантной ДНК иногда называют химерной ДНК , потому что они могут состоять из материала двух разных видов, например из мифической химеры . Технология R-ДНК использует палиндромные последовательности и приводит к образованию липких и тупых концов .

Последовательности ДНК, используемые при создании рекомбинантных молекул ДНК, могут происходить от любого вида . Например, ДНК растений может быть соединена с ДНК бактерий, или ДНК человека может быть соединена с ДНК грибов. Кроме того, последовательности ДНК, которые не встречаются в природе, могут быть созданы путем химического синтеза ДНК и включены в рекомбинантные молекулы. Используя технологию рекомбинантной ДНК и синтетическую ДНК, можно создать буквально любую последовательность ДНК и ввести ее в любой из очень широкого круга живых организмов.

Белки, которые могут быть результатом экспрессии рекомбинантной ДНК в живых клетках, называются рекомбинантными белками . Когда рекомбинантная ДНК, кодирующая белок, вводится в организм-хозяин, рекомбинантный белок не обязательно продуцируется. [1] Экспрессия чужеродных белков требует использования специализированных экспрессионных векторов и часто требует значительной реструктуризации чужеродными кодирующими последовательностями. [2]

Рекомбинантная ДНК отличается от генетической рекомбинации тем, что первая является результатом искусственных методов в пробирке, а вторая представляет собой нормальный биологический процесс, который приводит к повторному смешиванию существующих последовательностей ДНК практически во всех организмах.

Создание ДНК [ править ]

Основная статья: Молекулярное клонирование

Молекулярное клонирование - это лабораторный процесс, используемый для создания рекомбинантной ДНК. [3] [4] [5] [6] Это один из двух наиболее широко используемых методов, наряду с полимеразной цепной реакцией (ПЦР), используемых для управления репликацией любой конкретной последовательности ДНК, выбранной экспериментатором. Между методами есть два принципиальных различия. Один из них заключается в том, что молекулярное клонирование включает репликацию ДНК в живой клетке, в то время как ПЦР реплицирует ДНК в пробирке, свободной от живых клеток. Другое отличие состоит в том, что клонирование включает вырезание и вставку последовательностей ДНК, в то время как ПЦР амплифицируется путем копирования существующей последовательности.

Для образования рекомбинантной ДНК требуется вектор клонирования , молекула ДНК, которая реплицируется в живой клетке. Векторы, как правило, происходят из плазмид или вирусов и представляют собой относительно небольшие сегменты ДНК, которые содержат необходимые генетические сигналы для репликации, а также дополнительные элементы для удобства вставки чужеродной ДНК, идентификации клеток, содержащих рекомбинантную ДНК, и, при необходимости, экспрессии чужеродная ДНК. Выбор вектора для молекулярного клонирования зависит от выбора организма-хозяина, размера ДНК, которую нужно клонировать, а также от того, должна ли и как экспрессироваться чужеродная ДНК. [7] Сегменты ДНК можно объединить с помощью различных методов, таких как клонирование рестриктазой / лигазой илиСборка Гибсона .

В стандартных протоколах клонирования клонирование любого фрагмента ДНК по существу включает семь этапов: (1) выбор организма-хозяина и вектора клонирования, (2) получение векторной ДНК, (3) подготовка ДНК для клонирования, (4) создание рекомбинантная ДНК, (5) введение рекомбинантной ДНК в организм-хозяин, (6) отбор организмов, содержащих рекомбинантную ДНК, и (7) скрининг клонов с желаемыми вставками ДНК и биологическими свойствами. [6] Эти шаги подробно описаны в соответствующей статье ( молекулярное клонирование ).

Выражение ДНК [ править ]

Основная статья: Производство белка

После трансплантации в организм-хозяин чужеродная ДНК, содержащаяся в конструкции рекомбинантной ДНК, может экспрессироваться или не экспрессироваться . То есть ДНК может просто реплицироваться без экспрессии, или она может транскрибироваться и транслироваться, и получается рекомбинантный белок. Вообще говоря, экспрессия чужеродного гена требует реструктуризации гена для включения последовательностей, которые требуются для производства молекулы мРНК , которая может использоваться аппаратом трансляции хозяина (например, промотором , сигналом инициации трансляции и терминатором транскрипции ). [8]В организм-хозяин могут быть внесены специфические изменения для улучшения экспрессии эктопического гена. Кроме того, могут потребоваться изменения и в кодирующих последовательностях, чтобы оптимизировать трансляцию, сделать белок растворимым, направить рекомбинантный белок в нужное клеточное или внеклеточное местоположение и стабилизировать белок от деградации. [9] [10]

Свойства организмов, содержащих рекомбинантную ДНК [ править ]

В большинстве случаев организмы, содержащие рекомбинантную ДНК, имеют явно нормальный фенотип . То есть их внешний вид, поведение и метаболизм обычно не изменяются, и единственный способ продемонстрировать присутствие рекомбинантных последовательностей - это исследовать саму ДНК, обычно с использованием теста полимеразной цепной реакции (ПЦР). [11] Существуют значительные исключения, которые обсуждаются ниже.

Если последовательности рДНК кодируют экспрессируемый ген, то присутствие РНК и / или белковых продуктов рекомбинантного гена может быть обнаружено, как правило, с использованием методов ОТ-ПЦР или вестерн-гибридизации . [11] Грубые фенотипические изменения не являются нормой, если только рекомбинантный ген не был выбран и модифицирован таким образом, чтобы вызвать биологическую активность в организме хозяина. [12] Дополнительные фенотипы, которые встречаются, включают токсичность для организма-хозяина, вызванную продуктом рекомбинантного гена, особенно если он чрезмерно экспрессируется или экспрессируется в неподходящих клетках или тканях.

В некоторых случаях рекомбинантная ДНК может оказывать вредное воздействие, даже если она не экспрессируется. Одним из механизмов, с помощью которого это происходит, является инсерционная инактивация , при которой рДНК вставляется в ген клетки-хозяина. В некоторых случаях исследователи используют это явление, чтобы « выбить » гены, чтобы определить их биологическую функцию и важность. [13]Другой механизм, с помощью которого вставка рДНК в хромосомную ДНК может влиять на экспрессию генов, - это неправильная активация ранее не экспрессируемых генов клетки-хозяина. Это может произойти, например, когда фрагмент рекомбинантной ДНК, содержащий активный промотор, оказывается рядом с ранее молчащим геном клетки-хозяина, или когда ген клетки-хозяина, который функционирует для сдерживания экспрессии гена, подвергается инсерционной инактивации рекомбинантной ДНК.

Применение ДНК [ править ]

Рекомбинантная ДНК широко используется в биотехнологии , медицине и исследованиях . Сегодня рекомбинантные белки и другие продукты, полученные в результате использования технологии ДНК, можно найти практически в каждой западной аптеке, у врача или ветеринара, в медицинской испытательной лаборатории и лаборатории биологических исследований. Кроме того, организмы, которыми манипулировали с использованием технологии рекомбинантной ДНК, а также продукты, полученные из этих организмов, нашли свое применение во многих фермах, супермаркетах , шкафах для домашней медицины и даже в зоомагазинах, например, в магазинах GloFish и других генетических продуктах. модифицированные животные .

Чаще всего рекомбинантная ДНК применяется в фундаментальных исследованиях, в которых технология важна для большинства текущих работ в биологических и биомедицинских науках. [11] Рекомбинантная ДНК используется для идентификации, картирования и определения последовательности генов, а также для определения их функции. Зонды рДНК используются для анализа экспрессии генов в отдельных клетках и в тканях целых организмов. Рекомбинантные белки широко используются в качестве реагентов в лабораторных экспериментах и ​​для создания зондов антител для изучения синтеза белка в клетках и организмах. [4]

Многие дополнительные практические применения рекомбинантной ДНК находят в промышленности, производстве продуктов питания, медицине и ветеринарии, сельском хозяйстве и биоинженерии. [4] Некоторые конкретные примеры приведены ниже.

Рекомбинантный химозин
Найдено в сычуге , химозин представляет собой фермент , необходимый для производства сыра. Это была первая пищевая добавка, созданная с помощью генной инженерии, которая используется в коммерческих целях. Традиционно переработчики получали химозин из сычужного фермента, препарата, полученного из четвертого желудка телят, вскармливаемых молоком. Ученые разработали непатогенный штамм (K-12) бактерий E. coli для крупномасштабного лабораторного производства фермента. Этот рекомбинантный фермент, полученный микробиологически, идентичный по структуре ферменту, полученному из теленка, стоит меньше и производится в больших количествах. Сегодня около 60% твердого сыра в США производится с использованием химозина, созданного с помощью генной инженерии. В 1990 году FDA присвоило химозину статус « общепризнанного безопасного » (GRAS) на основании данных, показывающих, что этот фермент безопасен. [14]
Рекомбинантный человеческий инсулин
Практически полностью заменил инсулин, полученный из животных источников (например, свиней и крупного рогатого скота) для лечения инсулинозависимого диабета . Широко используется множество различных препаратов рекомбинантного инсулина. [15] Рекомбинантный инсулин синтезируется путем встраивания гена человеческого инсулина в E. coli или дрожжи (Saccharomyces cerevisiae) [16], которые затем производят инсулин для использования человеком. [17]
Рекомбинантный гормон роста человека (гормон роста, соматотропин)
Применяется пациентам, у которых гипофиз вырабатывает недостаточное количество для поддержания нормального роста и развития. До того, как рекомбинантный гормон роста стал доступным, гормон роста для терапевтического использования был получен из гипофиза трупов. Эта небезопасная практика привела к развитию у некоторых пациентов болезни Крейтцфельдта – Якоба . Рекомбинантный гормон роста устранил эту проблему и теперь используется в терапевтических целях. [18] Атлеты и другие люди злоупотребляли им как лекарственным средством, повышающим спортивные результаты. [19] Запись в DrugBank
Рекомбинантный фактор свертывания крови VIII
Белок свертывания крови, который вводят пациентам с формами гемофилии с нарушением свертываемости крови, которые не могут продуцировать фактор VIII в количествах, достаточных для поддержания нормальной свертываемости крови. [20] До разработки рекомбинантного фактора VIII белок был получен путем обработки больших количеств человеческой крови от нескольких доноров, что несло очень высокий риск передачи инфекционных заболеваний , передающихся через кровь , например ВИЧ и гепатита B. Запись в DrugBank
Рекомбинантная вакцина против гепатита В
Инфекция гепатита B контролируется с помощью использования рекомбинантной вакцины против гепатита B, которая содержит форму поверхностного антигена вируса гепатита B, который продуцируется в дрожжевых клетках. Разработка рекомбинантной субъединичной вакцины была важной и необходимой разработкой, поскольку вирус гепатита В, в отличие от других распространенных вирусов, таких как вирус полиомиелита , не может быть выращен in vitro . Информация о вакцинах от Фонда гепатита В
Диагностика заражения ВИЧ
Каждый из трех широко используемых методов диагностики ВИЧ-инфекции был разработан с использованием рекомбинантной ДНК. Тест на антитела ( ELISA или вестерн-блоттинг ) использует рекомбинантный белок ВИЧ для проверки наличия антител, которые организм вырабатывает в ответ на ВИЧ-инфекцию. ДНК-тест проверяет наличие генетического материала ВИЧ с помощью полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР). Разработка теста RT-PCR стала возможной благодаря молекулярному клонированию и анализу последовательности геномов ВИЧ. Страница тестирования на ВИЧ из Центров по контролю за заболеваниями США (CDC)
Золотой рис
Рекомбинантный сорт риса, который был разработан для экспрессии ферментов, ответственных за биосинтез β-каротина . [12] Этот сорт риса может существенно снизить уровень дефицита витамина А среди населения мира. [21] Золотой рис в настоящее время не используется в ожидании решения нормативных вопросов и вопросов интеллектуальной собственности [22] .
Устойчивые к гербицидам культуры
Были разработаны коммерческие сорта важных сельскохозяйственных культур (включая сою, кукурузу / кукурузу, сорго, канолу, люцерну и хлопок), которые включают рекомбинантный ген, который приводит к устойчивости к гербициду глифосату (торговое название Roundup ) и упрощает борьбу с сорняками с помощью глифосата. заявление. [23] Эти культуры широко используются в коммерческих целях в нескольких странах.
Устойчивые к насекомым культуры
Bacillus thuringeiensis - это бактерия, которая естественным образом вырабатывает белок ( токсин Bt ) с инсектицидными свойствами. [21] Бактерия применялась к сельскохозяйственным культурам в качестве стратегии борьбы с насекомыми в течение многих лет, и эта практика получила широкое распространение в сельском хозяйстве и садоводстве. Недавно были разработаны растения, которые экспрессируют рекомбинантную форму бактериального белка, которая может эффективно контролировать некоторых насекомых-хищников. Экологические проблемы, связанные с использованием этих трансгенных культур, полностью не решены. [24]

История [ править ]

Идея рекомбинантной ДНК была впервые предложена Питером Лоббаном, аспирантом профессора Дейла Кайзера с факультета биохимии Медицинской школы Стэнфордского университета. [25] Первые публикации, описывающие успешное производство и внутриклеточную репликацию рекомбинантной ДНК, появились в 1972 и 1973 годах в Стэнфорде и UCSF . [26] [27] [28] [29] В 1980 году Пол Берг , профессор кафедры биохимии в Стэнфорде и автор одной из первых статей [26], был удостоен Нобелевской премии по химии за свою работу по нуклеиновым кислотам. «с особым вниманием к рекомбинантной ДНК». Вернер Арбер, Гамильтон Смит и Дэниел Натанс разделили Нобелевскую премию по физиологии и медицине 1978 года за открытие рестрикционных эндонуклеаз, которые усовершенствовали методы технологии рДНК.

Стэнфордский университет подал заявку на патент США на рекомбинантную ДНК в 1974 году, указав в качестве изобретателей Герберта Бойера (профессора Калифорнийского университета в Сан-Франциско ) и Стэнли Н. Коэна (профессора Стэнфордского университета ); этот патент был получен в 1980 году. [30] Первым лицензированным лекарством, созданным с использованием технологии рекомбинантной ДНК, был человеческий инсулин, разработанный Genentech и лицензированный Eli Lilly and Company . [31]

Противоречие [ править ]

Ученые, связанные с первоначальной разработкой методов рекомбинантной ДНК, признали, что существует возможность существования у организмов, содержащих рекомбинантную ДНК, нежелательных или опасных свойств. На конференции Asilomar 1975 года по рекомбинантной ДНКэти опасения были обсуждены, и был введен добровольный мораторий на исследования рекомбинантной ДНК для экспериментов, которые считались особенно рискованными. Этот мораторий широко соблюдался до тех пор, пока Национальные институты здравоохранения (США) не разработали и не выпустили официальные инструкции по работе с рДНК. Сегодня рекомбинантные молекулы ДНК и рекомбинантные белки обычно не считаются опасными. Однако остаются опасения по поводу некоторых организмов, которые экспрессируют рекомбинантную ДНК, особенно когда они покидают лабораторию и попадают в окружающую среду или в пищевую цепь. Эти опасения обсуждаются в статьях о генетически модифицированных организмах и спорах о генетически модифицированных пищевых продуктах.. Кроме того, существуют опасения по поводу побочных продуктов в биофармацевтическом производстве, когда рекомбинантная ДНК приводит к образованию специфических белковых продуктов. Основной побочный продукт, называемый белком клетки-хозяина , исходит из системы экспрессии хозяина и представляет угрозу для здоровья пациента и окружающей среды в целом. [32] [33]

См. Также [ править ]

  • Конференция Asilomar по рекомбинантной ДНК
  • Генная инженерия
  • Генетически модифицированный организм
  • Рекомбинантный вирус
  • Векторная ДНК
  • Биомолекулярная инженерия
  • Технология рекомбинантной ДНК
  • Белок клетки-хозяина

Ссылки [ править ]

  1. ^ Rosano, Germán L .; Чеккарелли, Эдуардо А. (17 апреля 2014 г.). «Экспрессия рекомбинантного белка в Escherichia coli: достижения и проблемы» . Границы микробиологии . 5 : 172. DOI : 10,3389 / fmicb.2014.00172 . ISSN  1664-302X . PMC  4029002 . PMID  24860555 .
  2. ^ «Промоторы, используемые для регулирования экспрессии генов» . www.cambia.org . Проверено 16 февраля 2018 .
  3. ↑ Кэмпбелл, Нил А. и Рис, Джейн Б. (2002). Биология (6-е изд.) . Сан-Франциско: Эддисон Уэсли. С. 375–401. ISBN 978-0-201-75054-6.
  4. ^ a b c Питер Уолтер; Альбертс, Брюс; Джонсон, Александр С .; Льюис, Джулиан; Рафф, Мартин С .; Робертс, Кит (2008). Молекулярная биология клетки (5-е издание, расширенная версия) . Нью-Йорк: Наука о гирляндах. ISBN 978-0-8153-4111-6.. Четвертое издание доступно в Интернете на книжной полке NCBI: ссылка
  5. ^ Берг, Джереми Марк; Тимочко, Джон Л .; Страйер, Люберт (2010). Биохимия, 7-е изд. (Биохимия (Берг)) . WH Freeman & Company. ISBN 978-1-4292-2936-4.Пятое издание доступно онлайн на книжной полке NCBI: ссылка
  6. ^ a b Уотсон, Джеймс Д. (2007). Рекомбинантная ДНК: гены и геномы: краткий курс . Сан-Франциско: WH Freeman. ISBN 978-0-7167-2866-5.
  7. ^ Рассел, Дэвид В .; Сэмбрук, Джозеф (2001). Молекулярное клонирование: лабораторное руководство . Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк: Лаборатория Колд-Спринг-Харбор. ISBN 978-0-87969-576-7.
  8. ^ Hannig, G .; Макридес, С. (1998). «Стратегии оптимизации экспрессии гетерологичных белков в Escherichia coli». Тенденции в биотехнологии . 16 (2): 54–60. DOI : 10.1016 / S0167-7799 (97) 01155-4 . PMID 9487731 . 
  9. ^ Brondyk, WH (2009). «Глава 11 Выбор подходящего метода экспрессии рекомбинантного белка». Руководство по очистке белков, 2-е издание . Методы в энзимологии. 463 . С. 131–147. DOI : 10.1016 / S0076-6879 (09) 63011-1 . ISBN 9780123745361. PMID  19892171 .
  10. ^ Ортега, Клаудиа; Прието, Даниэль; Абреу, Сесилия; Оппеццо, Пабло Хавьер; Корреа, Агустин (2018). «Набор векторов с несколькими отсеками и несколькими хозяевами для экспрессии и очистки рекомбинантного белка» . Границы микробиологии . 9 : 1384. DOI : 10,3389 / fmicb.2018.01384 . ISSN 1664-302X . PMC 6030378 . PMID 29997597 .   
  11. ^ a b c Браун, Терри (2006). Клонирование генов и анализ ДНК: введение . Кембридж, Массачусетс: Blackwell Pub. ISBN 978-1-4051-1121-8.
  12. ^ a b Ye, X .; Аль-Бабили, С .; Klöti, A .; Zhang, J .; Lucca, P .; Beyer, P .; Потрикус И. (2000). «Разработка пути биосинтеза провитамина А (бета-каротина) в (не содержащий каротиноидов) эндосперм риса». Наука . 287 (5451): 303–305. Bibcode : 2000Sci ... 287..303Y . DOI : 10.1126 / science.287.5451.303 . PMID 10634784 . 
  13. ^ Коллер, BH; Smithies, О. (1992). «Изменение генов у животных путем нацеливания на гены». Ежегодный обзор иммунологии . 10 : 705–730. DOI : 10.1146 / annurev.iy.10.040192.003421 . PMID 1591000 . 
  14. ^ Донна У. Фогт и Микки Пэриш. (1999) Пищевая биотехнология в США: наука, регулирование и проблемы
  15. ^ Гуаланди-Синьорини, А .; Георгий, Г. (2001). «Составы инсулина - обзор». Европейский обзор медицинских и фармакологических наук . 5 (3): 73–83. PMID 12004916 . 
  16. ^ # Инсулин аспарт
  17. ^ DrugBank: Обычный инсулин (DB00030)
  18. ^ Фон Фанге, Т .; McDiarmid, T .; MacKler, L .; Золотор, А. (2008). «Клинические исследования: Может ли рекомбинантный гормон роста эффективно лечить идиопатический низкий рост?». Журнал семейной практики . 57 (9): 611–612. PMID 18786336 . 
  19. ^ Фернандес, М .; Хози, Р. (2009). «Наркотики, повышающие спортивную результативность, ловят и не спортсменов». Журнал семейной практики . 58 (1): 16–23. PMID 19141266 . 
  20. Перейти ↑ Manco-Johnson, MJ (2010). «Достижения в уходе и лечении детей с гемофилией». Успехи педиатрии . 57 (1): 287–294. DOI : 10.1016 / j.yapd.2010.08.007 . PMID 21056743 . 
  21. ^ а б Пейн, Дж. А; Шиптон, Калифорния; Chaggar, S .; Хауэллс, РМ; Кеннеди, MJ; Vernon, G .; Райт, штат Вашингтон; Hinchliffe, E .; Адамс, JL; Сильверстоун, Алабама; Дрейк, Р. (2005). «Повышение питательной ценности золотого риса за счет увеличения содержания провитамина А». Природа Биотехнологии . 23 (4): 482–487. DOI : 10.1038 / nbt1082 . PMID 15793573 . S2CID 632005 .  
  22. ^ Deccan Herald, «Иностранная группа поддерживает« золотой рис »в Индии», 18 марта 2015 г. http://www.deccanherald.com/content/466247/foreign-group-roots-golden-rice.html
  23. ^ Funke, T .; Han, H .; Healy-Fried, M .; Фишер, М .; Шенбрунн, Э. (2006). «Молекулярная основа устойчивости к гербицидам культур Roundup Ready» . Труды Национальной академии наук . 103 (35): 13010–13015. Bibcode : 2006PNAS..10313010F . DOI : 10.1073 / pnas.0603638103 . PMC 1559744 . PMID 16916934 .  
  24. ^ Мендельсон, М .; Kough, J .; Vaituzis, Z .; Мэтьюз, К. (2003). "Безопасны ли Bt-культуры?" . Природа Биотехнологии . 21 (9): 1003–1009. DOI : 10.1038 / nbt0903-1003 . PMID 12949561 . S2CID 16392889 .  
  25. ^ Лир, Дж. (1978). Рекомбинантная ДНК: невыразимая история . Нью-Йорк: Crown Publishers. п. 43.
  26. ^ a b Джексон, Д .; Саймонс, Р.; Берг, П. (1972). «Биохимический метод встраивания новой генетической информации в ДНК обезьяньего вируса 40: кольцевые молекулы ДНК SV40, содержащие гены лямбда-фага и оперон галактозы Escherichia coli» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 69 (10): 2904–2909. Bibcode : 1972PNAS ... 69.2904J . DOI : 10.1073 / pnas.69.10.2904 . PMC 389671 . PMID 4342968 .  
  27. ^ Mertz, JE; Дэвис, Р.В. (1972). «Расщепление ДНК эндонуклеазой рестрикции R 1 приводит к образованию липких концов» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 69 (11): 3370–4. Полномочный код : 1972PNAS ... 69.3370M . DOI : 10.1073 / pnas.69.11.3370 . PMC 389773 . PMID 4343968 .  
  28. ^ Лоббан, П .; Кайзер, А. (1973). «Ферментативное соединение молекул ДНК от конца к концу». Журнал молекулярной биологии . 78 (3): 453–471. DOI : 10.1016 / 0022-2836 (73) 90468-3 . PMID 4754844 . 
  29. ^ Коэн, S .; Чанг, А .; Boyer, H .; Хеллинг, Р. (1973). «Конструирование биологически функциональных бактериальных плазмид in vitro» . Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки . 70 (11): 3240–3244. Bibcode : 1973PNAS ... 70.3240C . DOI : 10.1073 / pnas.70.11.3240 . PMC 427208 . PMID 4594039 .  
  30. Перейти ↑ Hughes, S. (2001). «Создание долларов из ДНК. Первый крупный патент в области биотехнологии и коммерциализации молекулярной биологии, 1974-1980» (PDF) . Исида; Международный обзор, посвященный истории науки и ее культурному влиянию . 92 (3): 541–575. DOI : 10.1086 / 385281 . ЛВП : 10161/8125 . PMID 11810894 .  
  31. ^ Джонсон, IS (1983). «Человеческий инсулин из технологии рекомбинантной ДНК». Наука . 219 (4585): 632–637. Bibcode : 1983Sci ... 219..632J . DOI : 10.1126 / science.6337396 . PMID 6337396 . 
  32. ^ Ван, Син; Хантер, Алан К .; Мозье, Нед М. (15.06.2009). «Белки клетки-хозяина в разработке биопрепаратов: идентификация, количественное определение и оценка риска» . Биотехнология и биоинженерия . 103 (3): 446–458. DOI : 10.1002 / bit.22304 . ISSN 0006-3592 . PMID 19388135 . S2CID 22707536 .   
  33. ^ Bracewell, Daniel G .; Фрэнсис, Ричард; Smales, К. Марк (2015-07-14). «Будущее идентификации белков клетки-хозяина (HCP) в процессе разработки и производства связано с управлением, основанным на оценке риска» . Биотехнология и биоинженерия . 112 (9): 1727–1737. DOI : 10.1002 / bit.25628 . ISSN 0006-3592 . PMC 4973824 . PMID 25998019 .   

Дальнейшее чтение [ править ]

  • Восьмой день творения: создатели революции в биологии . Книги Touchstone, ISBN 0-671-22540-5 . 2-е издание: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1996 г. в мягкой обложке: ISBN 0-87969-478-5 .  
  • Миклас, Дэвид. 2003. Наука о ДНК: первый курс . Пресса Колд-Спринг-Харбор: ISBN 978-0-87969-636-8 . 
  • Расмуссен, Николас , Джин-Жокеи: Наука о жизни и рост биотехнологического предприятия , Johns Hopkins University Press, (Балтимор), 2014 . ISBN 978-1-42141-340-2 . 
  • Розенфельд, Израиль. 2010. ДНК: Графический путеводитель по молекуле, которая потрясла мир . Издательство Колумбийского университета: ISBN 978-0-231-14271-7 . 
  • Шульц, Марк и Зандер Кэннон. 2009. Материал жизни: графическое руководство по генетике и ДНК . Хилл и Ван: ISBN 0-8090-8947-5 . 
  • Ватсон, Джеймс. 2004. ДНК: Секрет жизни . Случайный дом: ISBN 978-0-09-945184-6 . 

Внешние ссылки [ править ]

Библиотечные ресурсы о
рекомбинантных белках
  • Ресурсы в вашей библиотеке
  • Ресурсы в других библиотеках
  • Информационный бюллетень по рекомбинантной ДНК (из Университета Нью-Гэмпшира)
  • Плазмиды в дрожжах (информационный бюллетень Государственного университета Сан-Диего)
  • Анимация, иллюстрирующая создание рекомбинантной ДНК и продукцию чужеродного белка рекомбинантными бактериями
  • Исследование рекомбинантной ДНК в UCSF и коммерческое применение в Genentech Отредактированная стенограмма интервью 1994 года с Гербертом Бойером, проект «Живая история». Устная история.
  • Руководство по принципам и методам очистки рекомбинантных белков